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DNA的粗提与鉴定（菜花）

一、实验原理

1、研磨液中的变性剂SDS可促使细胞破裂，释放出DNA。

2、DNA不溶于酒精，而细胞中的某些物质溶于酒精。因此，可用乙醇进一步提取出含杂质较少的DNA。

3、DNA中的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，在沸水浴条件下，它和二苯胺试剂反应使溶液呈蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

二、实验目的

1、掌握DNA的粗提取原理；

2、掌握利用二苯胺鉴定DNA的方法。三、仪器与用具

研磨过滤器，微量可调移液器，水浴锅，试管，试管架，DNA粗提取与鉴定试剂盒。

四、实验方法与步骤

1、DNA粗提：

切取菜花表层花5g，放入研磨过滤器外套筒中，加入2mL研磨液，插入研磨杆，充分研磨3～5min。

打开研磨杆上盖，用移液器取出研磨液1mL，转至试管中，缓慢向试管中加入两倍体积的冷无水乙醇，轻轻旋转试管，有白色絮状DNA出现。

2、鉴定：

用玻璃棒挑出白色絮状DNA，并轻轻挤压转入另一试管中，加1mL蒸馏水，使其充分溶解。再加入1mL二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色。

另取一试管，在其中加入1mL蒸馏水和1mL二苯胺试剂作为对照。将两试管在沸水浴中加热10min，在加热过程中，随时观察两试管中溶液颜色。

五、实验结果与分析

如图1所示，在加入DNA溶液的试管中，颜色变为蓝色；而对照的试管中无颜色变化。说明提取出了菜花中的DNA。

图1DNA鉴定结果

酵母细胞的固定化

一、实验原理

固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或者化学的方法将酶或者细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法，化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）和物理吸附法固定化，细胞多采用包埋法固定化。因为细胞个大，而酶分子很小，个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。

常用的包埋载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。本实验选用海藻酸钠作为载体包埋酵母细胞。

二、实验目的

1、了解细胞固定化的原理；

2、掌握酵母细胞固定化实验操作。

三、仪器与用具

1、酵母细胞固定化试剂盒；2、水浴锅；3、量筒；4、注射器；5、烧杯；6、三角瓶；

7、玻璃棒。

四、试剂配制

酵母液：称取1g干酵母加水10mL混合均匀；

CaCl溶液：称取0.83g无水氯化钙加150mL水溶解待用；

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海藻酸钠溶液：称取0.7g海藻酸钠加入10mL水加热溶解成糊状；

10%葡萄糖溶液：称取15g葡萄糖溶于150mL水中。

五、实验方法与步骤

1、活化酵母细胞：将酵母液室温放置1h左右，使其活化。

2、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合：将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已经活化的酵母细胞，充分搅拌混合均匀。

3、固定化酵母细胞：用注射器吸取海藻酸钠与酵母细胞混合液，在恒定的高度（建议距液面12～15cm处，过低凝胶珠形状不规则，过高液体容易飞溅），缓慢将混合液滴加到

CaCl溶液中，观察液滴在CaCl溶液中形成凝胶珠的情形。将凝胶珠在CaCl溶液中浸泡

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30min左右使其充分固定。

4、固定化酵母细胞发酵：将固定好的凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次，加入装有150mL10%葡萄糖溶液的三角瓶中，置于25℃发酵24h，观察结果。

六、实验结果与分析

图1酵母细胞的固定化图 2固定化酵母细胞发酵葡萄糖溶液前图3固定化酵母细胞发酵葡萄糖溶液后

外植体的消毒及其愈伤组织的诱导

一、实验目的：

通过实验，初步掌握外植体材料的消毒、接种的无菌操作技术以及外植体愈伤组织的诱导方法。

二、实验原理：

植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体植物器官或组织、甚至单个细胞的过程，如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增值的无特定结构和功能的细胞团—愈伤组织，而植物生长调节剂2,4-D是诱导外植体形成愈伤组织的重要影响因素，本实验采用MS培养基添加2,4-D来诱导胡萝卜的愈伤组织。

三、实验材料、试剂及器具

①材料：新鲜的胡萝卜块根

②试剂及培养基：0.1%HgCl2（剧毒！小心使用）、75%乙醇、无菌水胡萝卜块根愈伤组织诱导的培养基：

MS+2,4-D（1mg/L）+蔗糖（30g/L）+琼脂（8g/L）pH5.8-6.0

③器具：超净工作台、酒精灯、烧杯、镊子、剪刀、解剖刀、无菌水吸水纸、标签纸、记号笔

四、实验步骤：

①接种前，