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水生态毒理研究组环境样品中污染物分析方法规范1

地表水中六种雌激素化合物分析规范

注：本方法适用于地表水、饮用水和污水中六种雌激素化合物的测定

1.目标化合物

天然动物性雌激素雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)和作为药物使用的人工合成的雌激素类

药物己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)、乙烷雌酚、炔诺酮等在极低的环

境浓度(ng/L)下就可能对生物体造成危害。引起了世界各国的广泛关注。但由于研究相对滞后，

美国国家环保局、世界卫生组织和世界动物基金会均未对该类物质作出明确的规定。雌酮(E1)、

雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、己烯雌酚(DES)、乙炔基雌二醇(EE2)、戊酸雌二醇(EV)是比较常见

和典型的内分泌干扰物质，本研究以上面六种雌激素为目标化合物。

1.1.试剂

甲醇（Methanol），HPLC级（美国FisherScientific公司）；丙酮：色谱纯TEDIA

（）；

正己烷（n-Hexane），农残级（美国FisherScientific公司）；叔丁基甲醚：J.T.Baker,US；

硅胶（60－200目），超纯（美国ACROSORGANICS）；中性氧化铝（50－200目），（美国ACROS

ORGANICS）；无水硫酸钠，优级纯，经450℃焙烧12h后置于密封广口瓶中保存备用；

雌激素分析用标准物质：衍生化试剂：N,O－双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺，简称BSTFA

（FLUKA），TMSI；EE(乙炔基雌二醇)，ALDRICH；E1(雌酮)，SIGMA；E2(雌二醇)MERCK；

E3(雌三醇)，FLUKA；EV(戊酸雌二醇)SIGMA；DES(己烯雌酚)FLUKA。

剪刀、滤纸、镊子及药匙（硅胶柱净化所用）：以二氯甲烷超声清洗15min两次、正己烷超声

清洗15min一次；首先硅胶和氧化铝先使用二氯甲烷抽提72小时，然后硅胶在180±2℃、氧

化铝在250±2℃分别活化12h（activate）；待冷却至室温时，称重后装入大口锥形瓶（250或

500mL），加入其重量3％的蒸馏水去活性（deactivate），添加过程中应用滴管逐滴加入，边加

边用力振摇以防止结块，并超声振荡30min；放置过夜，平衡后加入正己烷浸没其表面备用（一

般也需放置过夜）；玻璃滤膜，经450℃焙烧4h，准确称重,放入干燥器中放置备用。

1.2.仪器

超声波清洗仪(KQ－250D型数控超声波清洗器)

恒温水浴锅（中国科工卫仪器仪表公司）

旋转旋蒸仪(Buchi,Vac®500/rotavaporR-200/HeatingbathB-490,Germany)

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水生态毒理研究组环境样品中污染物分析方法规范1

氮吹仪(数控氮吹仪，KL512/5093,康林,北京)

气相色谱质谱连用仪：GC6890-MSD5973(AgilentTechnologies，美国)，使用G1701DAMSD

ChemStation分析处理数据；

毛细色谱柱：HP-5石英毛细管色谱柱：30m0.32mmID0.25m液膜厚

蠕动泵，玻璃滤膜支架，直径50mm×孔径1.0μm玻璃滤膜(MillporeCo.,北京联星事业

公司代理)

SPE固相萃取小柱(HLB，WatersCo.)

固相萃取真空装置(12小柱，SupcoCo.配有12根聚四氟乙烯导管)

真空泵(SupcoCo.）

100级超净工作室；

高纯氮气

2.玻璃仪器及其它用品

专用玻仪：鸡心瓶、K.D浓缩器、8ml定量样品瓶，层析柱（长35cm，内径1cm，带活

塞）、GC自动进样的样品瓶。

常规玻仪及其他用品：100ml、50ml、10ml量筒；200ml、100ml、50ml烧杯；500ml、50