降钙素原的重组、表达及单克隆抗体的制备的任务书.docxVIP

降钙素原的重组、表达及单克隆抗体的制备的任务书

一、任务背景及要求

降钙素原是一种肽类激素，在钙、磷代谢、神经系统和免疫调节等方面具有重要作用。因此，研究降钙素原的表达、结构和功能对于人类健康具有重要意义。该任务要求对降钙素原进行重组、表达和单克隆抗体制备，以便于后续实验开展。

二、任务内容

（一）降钙素原基因的克隆和重组

1.根据已知序列设计降钙素原基因引物，进行PCR扩增；

2.克隆扩增得到的基因片段进入表达载体，构建重组质粒；

3.将重组质粒转化入宿主细胞，利用蛋白表达技术进行降钙素原的重组表达。

（二）降钙素原单克隆抗体制备

1.基于重组降钙素原，免疫Balb/c小鼠，提取小鼠脾细胞；

2.将脾细胞与骨髓瘤细胞融合，集落筛选得到单克隆细胞；

3.鉴定单克隆细胞的特异性，并进行扩充和冻存。

三、任务计划

任务周期为50天，具体计划如下：

1.第1-5天：设计引物，进行PCR扩增；

2.第6-10天：进行重组质粒构建；

3.第11-20天：转化宿主细胞，进行降钙素原的重组表达；

4.第21-30天：开展小鼠免疫和单克隆细胞筛选；

5.第31-40天：单克隆细胞鉴定、扩充和冻存；

6.第41-50天：数据统计和分析，撰写报告。

四、任务所需材料和设备

1.降钙素原基因序列、表达载体和宿主细胞；

2.PCR仪、电泳仪、蛋白电泳装置、细胞培养设备和冰箱等实验室常规设备；

3.Balb/c小鼠、骨髓瘤细胞和培养基等实验动物和试剂。

五、任务人员和分工

任务需由具有生物学、分子生物学及免疫学等专业知识和实验经验的人员组成，其中：

1.基因克隆人员负责引物设计、PCR扩增和克隆构建；

2.细胞培养人员负责重组质粒转化和蛋白表达；

3.免疫及细胞培养人员负责小鼠免疫和细胞融合；

4.单克隆细胞鉴定人员负责单克隆细胞筛选和鉴定。

六、任务成果

1.获得重组降钙素原蛋白；

2.获得具有高特异性的降钙素原单克隆抗体。

七、报告要求

1.实验过程和结果的详细记录；

2.获得降钙素原的表达、纯化和鉴定结果；

3.获得单克隆抗体的鉴定结果和性能特点；

4.数据分析和结果解释；

5.任务完成的评价和建议。