《临床检验基础》课件——第四讲血涂片的染色理论.pptVIP

适宜不适宜不适宜临床检验基础第四讲血涂片染色目录染色1观察2染色瑞氏染色法01姬姆萨染色法02瑞氏-吉姆萨染色03染色方法01瑞氏染色法PartOne1碱性染料为阳离子染料，能接受质子，细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。能结合酸性物质并染色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞染成蓝色2酸性染料为阴离子染料，能释放质子。如伊红。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等染成红色。染料组成毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等物理作用a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其它活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。c.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI，则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。化学作用原理图1-4瑞氏染色原理示意图嗜碱性粒细胞试剂01瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0mlWright染液02有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态。增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。甲醇：03（PBS，pH6.4-6.8）：磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。磷酸盐缓冲液用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。A加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。B滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。C用清水冲洗，待干后镜检。。D染色方法质量控制血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。染液不能过少，以防蒸发沉淀。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料沉着。冲洗时间也不能长。染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色.中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞02姬姆萨染色法PartTwo原理吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。吉姆萨染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检试剂03瑞氏-吉姆萨染色PartThree试剂瑞特染料1.0g吉姆萨染料0.3g甲醇（AR)加至500ml先将瑞特染料和吉姆萨染料充分研磨混匀，甲醇溶解倒入容器中，未溶解完的继续加入甲醇研磨，重复多次，最后把染液加至500ml。染色方法血片加滴加染液5滴，并立即将染液盖满血膜，2min后加入pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。方法学评价瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好，后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合，能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着色鲜艳，对比鲜明。瑞氏-吉姆萨混合染色法是临床上广泛使用的方法。04巴氏染色法PartFour是脱落细胞染色法中较好的染色方法。观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四123低倍镜观察