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实验4选择性培养基的配制

【目的】

了解选择性培养基的原理，并掌撮配制选择性培养基的方法和步骤。

【概述】

选择性培养基是一类根据某微生物的特殊营养要求或对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合苗样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。选择性培养基均含有增菌剂和选择剂Y样接种子这类培养基后，由于抑荫剂的选择性抑制作用.使所要分离的目的菌得到较好的繁殖，而其他菌被抑制。经过一定的培养时间后.再将目的菌接种到鉴别培养基上，可以提高目的菌的分离阳性率。抑菌剂的种类很多，如孔雀绿、煌绿、亚硒酸钠、去氧胆酸钠、胆盐、四硫磺酸钠或抗生素等，但加人量需准确，有的可以水溶液无菌配制冷藏备用。以上成分的用量、加人方法均按各类配方进行。

马丁氏培养基常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅可防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G一细菌生长，而链霉素对多数G一细菌具抑制生长作用，所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响，从而达到分离真菌的目的。

Ashby无氮培养基常用于从自然界环境中分离固氮菌。培养基中只含有基本的碳源和无机盐，没有氮源。一般的细菌不能在此培养基上生长，一些固氮的细菌可以利用空气中的氮气作为氮源，可以在此培养基上生长，从而达到分离固氮菌的目的。

【材料和器皿】

NaC1，CaSO4-2H2O，CaCO3,(2)器皿:台秤，烧杯，共角烧瓶，⑶其他:

NaC1，CaSO4-2H2O，CaCO3,(2)器皿:台秤，烧杯，共角烧瓶，⑶其他:药匙，pH试纸，称量纸报纸等。

【方法和步骤】

1.马丁氏培养基的配制

量筒，漏斗，试管，玻棒，加压蒸汽灭菌锅等。

棉花塞，纱布，线绳，不锈钢试管帽，牛皮纸，⑴培养基成分：葡萄糖10g

棉花塞，纱布，线绳，不锈钢试管帽，牛皮纸，

⑴培养基成分：

葡萄糖

10g

蛋白胨

5g

KH2PO4

1g

MgSO4-7H2O

0.5g

0.1%孟加拉红溶液

3.3ml

琼脂

16g

蒸馏水

1000ml

自然PH

2%去氧胆酸钠溶液

20ml

(预先灭菌，临用前加入)

(临用前加入)

然后依次逐一加人并溶化培养基各成分，再按

链霉素溶液(10000U/ml)3.3ml

(2)配制方法：

称量:称取培养基各成分的所需量。

溶化:在烧杯中加入约2/3所需水量

每1000ml培养基加人3.3ml的0.1%孟加拉红溶液。

定容:待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。

加琼脂:加人所需琼脂量，加热融化，补足失水。

分装，加塞，包扎。

加压蒸汽灭菌;12I°C灭菌20min。

临用前，加热融化培养基，待冷至60C左右，按每1000ml培养基以无菌操作加入20ml2%去氧胆酸钠溶液及3.3ml的链霉素溶液，迅速混匀。

2.Ashby氏无氮培养基的配制

⑴培养基成分：

甘露醇

10g

KH2PO4

0.2g

MgSO4-7H2O

0.2g

NaCl

0.2ml

CaSO4-2H2O

0.1g

CaCO3

5g

琼脂

15?20g

蒸馏水

1000ml

pH

7.2?7.4

(2)配制方法：

称量:称取培养墓各成分的所需量。

溶化:在烧杯中加人约2/3所需水量，依次逐一溶化培养基各成分。

定容。

调pH至7.2一7.4。

加琼脂:加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。

分装，加塞，包扎。：

加压蒸汽灭菌;121C(0.07MPa)灭菌20min。

【结果记录】

记录本实验配制培养基的时问、名称和数量。

【注意事项】

称药品用的牛角匙不要混用。

称完药品应及时盖紧瓶盖。

调pH时要小心操作，避免回调。

【思考题】

何谓选择性培养基？

在马丁氏培养基中的孟加拉红、链霉素各起什么作用？

Ashby氏无氮培养基为什么可以分离固氮菌？