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RKTG基因剔除小鼠模型的建立及功能分析开题报告

一、选题背景

RKTG基因（RafKinaseTrappingtoGolgi）又称FLJ22609，是在人类小肺癌组织中筛选到并克隆的一种新的抑癌基因。研究发现，RKTG基因能够通过引导Raf-1激酶到高尔基体分泌途径中的内质网-高尔基体中转运，从而抑制Raf-1激酶的活性，从而形成RKTG蛋白的保守功能。RKTG基因的缺失或低表达与许多肿瘤的发生发展和转移有关。

为了研究RKTG基因的生物学功能和机制，目前已经建立了多种RKTG基因敲除小鼠模型。然而，这些模型中的某些基因缺失影响了小鼠正常的发育和生长，导致了实验结果的误差。因此，需要建立一种新的完全敲除RKTG基因的小鼠模型，以更加准确地研究RKTG基因的生物学功能和机制。

二、研究目的和意义

本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，建立一种完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并对此模型进行功能分析，从而确定RKTG基因在小鼠生长和发育中的生物学功能和机制。本研究将为深入理解RKTG基因的功能、探讨其在肿瘤发生和转移中的作用提供新的实验基础。

三、研究内容和方法

研究内容：

（1）使用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠的RKTG基因。

（2）分别采用Westernblot和RT-qPCR技术检测敲除后小鼠体内RKTG基因蛋白和RNA的表达情况，确定敲除效果。

（3）对敲除后的小鼠进行生长和发育史迹的观察，通过测量小鼠体重、身长、头臂长等指标评估敲除RKTG基因对小鼠生长发育的影响。

（4）利用Westernblot和免疫组织化学等技术检测敲除RKTG基因对小鼠体内信号通路、细胞周期、凋亡等方面的影响。

研究方法：

本研究将采用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。敲除后，利用Westernblot和RT-qPCR技术检测小鼠体内RKTG基因蛋白和RNA的表达情况，确定敲除效果。同时，对敲除后的小鼠进行生长和发育史迹的观察，通过测量小鼠体重、身长、头臂长等指标评估敲除RKTG基因对小鼠生长发育的影响。最后，利用Westernblot和免疫组织化学等技术检测敲除RKTG基因对小鼠体内信号通路、细胞周期、凋亡等方面的影响。

四、预期成果和研究难点

预期成果：

本研究将成功建立一种完全敲除RKTG基因的小鼠模型，并对此模型进行生长和发育指标的观察和免疫学和分子生物学实验，从而深入探讨RKTG基因在小鼠中的生物学功能和机制。

研究难点：

（1）CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用和优化。

（2）建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型。

（3）对小鼠的生长和发育进行指标评估。

（4）对成年小鼠的信号通路、细胞周期、凋亡等方面进行免疫学和分子生物学实验。

五、可行性分析

本研究采用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立RKTG基因完全敲除的小鼠模型，该技术已经被广泛应用于医学和生命科学领域。同时，对小鼠的生长和发育进行指标评估，以及对小鼠的信号通路、细胞周期、凋亡等方面进行免疫学和分子生物学实验，这些都是经过验证的可行实验方法。因此，本研究具有较高的可行性。