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第十一章高效液相色谱法

Chapter11.highperformanceliquidchromatography；HPLC;高效液相色谱法定义及特点

高效液相色谱与气相色谱的区别

高效液相色谱分类及分离原理

高效液相色谱主要组成部件

高效液相色谱在环境应用

高效液相色谱分析方法的建立

高效液相色谱保养与维护

高效液相色谱定性与定量分析;11.1高效液相色谱法;高压：液相色谱法以液体为流动相，液体流经色谱柱时， 受到的阻力较大，为了能使其迅速通过色谱柱，须 对载液施加高压，150-350*105Pa；

高速：采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快。只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需数小时；

高效：柱填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀，传质阻力小，因而柱效高，数分钟完成数百物质的分离；

高灵敏度：紫外检测器最小检测量10-9g，荧光检测器灵敏度可达10-11g。

应用范围广：约80%的有机物，特别是高沸点、大分子和热稳定性差的有机化合物；;相同：兼具分离和分析功能， 均可以在线检测

主要差别：

分析对象

流动相

柱分离

操作条件;HPLC与GC异同点;按固定相分类;一、液液分配色谱法（LLC）二、液固吸附色谱法（LSC）三、化学键合相色谱法（CBC）四、离子对色谱法;·一、液液分配色谱法;□分离机制：

由于样品组分溶入固定相(s)与流动相（L）达到“平衡”分配系数K的差别而分离。分配达平衡时，服从分配系数公示K=Cs/CL

组分在固定相与流动相中的溶解度差别越大（K越大），分离效果越好;正相液液色谱法（NLLC）：固定液极性流动相极性极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱，适于

分离极性组分。

反相液液色谱法（RLLC）：固定液极性流动相极性极性的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离

非极性组分。;正相色谱法;13;14;·三、化学键合相色谱法（CBC）;化学键合色谱分类;化学键合色谱分离机制;正反相色谱中极性和保留时间的关系;定义：在流动相中加入与被测定离子相反电荷的离子对试剂，使之行成中性的离子对化合物，以分离离子型化合物或可离子化的化合物的方法。

分类：正相离子对色谱法（NPIC）和反相离子对色谱法（RPIC）

正相离子对色谱法（NPIC）很少使用，故只讨论反相离子对色谱法。;离子对色谱机理;离子对色谱机理;固定相：非极性键合相（C8和C18）

流动相：甲醇（乙腈）-水+离子对试剂;·五、离子交换色谱法;固定相：;流动相：;离子交换色谱法

油田水质中的阴离子分析

固定相：薄壳型阴离子交换树脂(3×250mm)

流动相：0.003mol·L-1NaHCO3/0.0024mol·L-1Na2CO3;色谱泵;HPLC仪器结构图;一、主要部件;记录30;高压输液系统

由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪的是核心部件。

功能: 驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统

特性：应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀。

分类:常用的输液泵分为恒流泵（常用）和恒压泵两种。;2.梯度淋洗装置;梯度洗脱的实现依赖于泵系统

分类：根据溶剂混合时所受的压力分为两种类型低压梯度（外梯度）

高压梯度（内梯度）;外梯度:;35;手动进样;自动进样器进样;4.分离系统——色谱柱;39;40;5．检测系统;紫外检测器(ultraviolet-visibledetector，UVD)

检测原理：基于被分析样品组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守朗伯－比尔(Lambert-Beer)定律。

响应信号（吸光度）与浓度成正比

A=㏑I0/I=εbc

I0为入射光强度；I为透射光强度；ε摩尔吸光系数，b为检测器光程长度；c为组分摩尔浓度;应用;荧光检测器 （fluorescencedetector）

在紫外光的激发下能发荧光的化合物或能用衍生法制成荧光衍生物的物质均可进行荧光检测。

特点：

√ 高灵敏度

比紫外检测器检测限高10-10g/ml

√ 高选择性；

对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素

、卟啉类化合物、农药、药物、氨基

酸、甾类化合物等有响应；

激发波长( ex)和发射波长( em)的选择；如菲、芘和苯并a芘的激发波长

：280、333和365nm；发射波长350、390和410nm;在食品研究中的分析应用

食品中的天然成分

√碳水化合物

√类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇

√脂肪酸和有机酸

√蛋白、肽、氨基酸食品添加剂

√酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂

√抗氧化剂、防腐剂

√颜料和染料（色素〕

√维生素污染物

√霉菌（黄曲霉毒素〕

√农