凝胶(5%浓缩胶11%的分离胶.docxVIP

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

(一)、配置不连续的凝胶(5%浓缩胶,11%的分离胶,采用化学聚合法)试剂:

1、Arc-Bis(30%):29.2gArc+0.8gBis加水稀释至100ml,4℃下棕色瓶保存。

2、10%的过硫酸铵:1克加水至10ml,棕色瓶保存一周。

3、TEMED原液

4、分离胶缓冲液(1.5MTris-HCl,pH=8.8):

27.23gTris溶于80ml水中,用6NHCl调pH至8.8,定容至150ml。

5、浓缩胶缓冲液(0.5MTris-HCl,pH=6.8):

6gTris溶于60ml水中,用6NHCl调pH至6.8,定容至100ml。

6、电极缓冲液(0.025MTris,0.192M甘氨酸,pH=8.3):

3.03gTris,14.4g甘氨酸,加水定容至1000。

7、样品缓冲液

5.8ml水+1ml pH6.8,0.5MTris-HCl+0.8ml的甘油(或2克蔗糖)+0.4ml 0.5%

的溴芬兰

8、染色液CBB-R250:甲醇500ml,乙酸100ml,CBB-R2501g,蒸馏水400ml

9、脱色液:乙酸70ml,甲醇50ml,蒸馏水880ml

(二)、电泳

(三)、染色与脱色

注:不同浓度聚丙烯胺凝胶的配置 10ml

T%

蒸馏水

凝胶缓

30%Arc-Bis

10%过硫

TEMED

ml

冲液

ml

贮液ml

酸铵ul

ul

*4%

6.15

2.5

1.33

70

10

*5%

5.8

2.5

1.67

70

10

6%

5.45

2.5

2.00

70

10

7%

5.15

2.5

2.33

70

5

8%

4.8

2.5

2.67

70

5

9%

4.45

2.5

3.0

70

5

10%

4.15

2.5

3.33

70

5

11%

3.8

2.5

3.67

70

5

12%

3.45

2.5

4.0

70

5

13%

3.15

2.5

4.33

70

5

14%

2.8

2.5

4.67

70

5

15%

2.45

2.5

5.0

70

5

16%

2.15

2.5

5.33

70

5

17%

1.8

2.5

5.67

70

5

4%-5%的凝胶是浓缩胶,用浓缩胶缓冲液,

6%-20%的凝胶是分离胶,用分离胶缓冲液。

六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶的分子量。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(5%浓缩胶,12-15%的分离胶,采用化学聚合法)试剂:

1、Arc-Bis(30%):29.2gArc+0.8gBis加水稀释至100ml,4℃下棕色瓶保存。

2、10%的过硫酸铵:1克加水至10ml,棕色瓶保存一周。

3、TEMED原液

4、分离胶缓冲液(1.5MTris-HCl,pH=8.8):

27.23gTris溶于80ml水中,用6NHCl调pH至8.8,定容至150ml。

5、浓缩胶缓冲液(0.5MTris-HCl,pH=6.8):

6gTris溶于60ml水中,用6NHCl调pH至6.8,定容至100ml。

6、电极缓冲液3.03gTris,14.4g甘氨酸,1gSDS,加水定容至1000ml。

(0.025MTris,0.192M甘氨酸,pH=8.3)7、样品缓冲液

0.8ml浓缩胶缓冲液+2ml 10%SDS+0.6ml巯基乙醇+2克蔗糖+0.05g溴芬兰,加

水至10ml。

8、染色液CBB-R250:甲醇500ml,乙酸100ml,CBB-R2501g,蒸馏水400ml

9、脱色液:乙酸70ml,甲醇50ml,蒸馏水880ml

SDS注:不同浓度聚丙烯胺凝胶的配置 10ml

SDS

T%

蒸馏水

凝胶缓

30%Arc-Bis

10%过硫

TEMED 10%

ml

冲液

ml

贮液ml

酸铵ul

ul ul

*4%

6.15

2.5

1.33

70

10

100

*5%

5.8

2.5

1.67

70

10

100

6%

5.45

2.5

2.00

70

10

100

7%

5.15

2.5

2.33

70

5

100

8%

4.8

2.5

2.67

70

5

100

9%

4.45

2.5

3.0

70

5

100

10%

4.15

2.5

3.33

70

5

100

11%

3.8

2.5

3.67

70

5

100

12%

3.45

2.5

4.0

70

5

100

13%

3.15

2.5

4.33

70

5

100

14%

2.8

2.5

4.67

70

5

100

15%

2.45

文档评论(0)

hao187 + 关注
官方认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

认证主体武汉豪锦宏商务信息咨询服务有限公司
IP属地上海
统一社会信用代码/组织机构代码
91420100MA4F3KHG8Q

1亿VIP精品文档

相关文档