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染色不良原因分析

俗话说：忠言逆耳，口蜜腹剑。

实验室染色效果不甚理想已不是一天两天的事了，肿瘤医院的技师们说：没法看。还有老师开玩笑，说要来砸摊子。所以，防患于未然方为上策。

常规染色步骤及原理：

自动制片完毕后, 进入人工染色程序。具体步骤如下：

1、涂片投入95%酒精固定液 固定15分钟。

目的：细胞及胞内物质形态稳定（由半液态变为半固态），易于染色。

原因：固态比液态（流动性）更具稳定性，着色更迅速，染色效果也更稳定。

2、水洗 用浓度由高到低的梯度酒精入水或直接自来水漂洗。目的：脱醇—置换出细胞内酒精，以便使水溶性苏木素进入。

3、苏木（水溶液）染核 时间灵活掌握，根据镜下观察染色效果确定。

4、水洗洗去过多残留苏木染液，

5、碱水（饱和碳酸锂）返蓝

目的：使苏木色精进一步形成，且使胞浆偏碱性，以便更好的与酸性染料结合。

6、水洗去多余碱水。

7、脱水 用浓度由低到高的梯度酒精或直接由水进入95%酒精。

8、橘黄和EA（O—E染色）染胞浆

操作：每次染后进入95%酒精漂净多余染液，以保证不影响下一步。

9、无水酒精脱水——二甲苯透明——树胶封固。

现有染色操作可能出现误差的步骤：

1、每栏玻片30张，从第一张到最后一张制备完毕约需1小时时间。正确固定时间要求是：大于15分钟，小于48小时。

如果制好一栏后马上进入水洗染色，最后几张涂片固定效果必然不良。所以：本步骤注意事项为：保证时间。

2、水洗脱醇应保证足够的时间和换水次数，

否则脱醇不彻底，会干扰水溶性苏木素进入细胞内进行染色反应。

3、苏木素的染色效果与本身的浓度、纯度，染色反应的速度直接相关。此外，染色速度还受温度影响（温度越高，染色速度越快，效果越好）。

所以：本步骤注意事项为：

苏木素的质量——每日过滤并加新液；

天气温度（室温）的变化——调整时间，温高则时间短，温度低则时间长，皆以镜下观察的效果为准灵活掌握。

4、碱水返蓝：

为水溶液,其浓度和纯度都会影响返蓝效果。

实验室现有的碱水使用时间过长，未能及时更换，其浓度、纯度必然下降。为加快速度或工作时间调整，玻片放入碱水中的时间常常偏长或偏短。

偏短——苏木色精形成不充分；

偏长——涂片在水溶液中浸泡过久会影响细胞固定效果,从而影响染色效果。以至于影响苏木素的显色效果和下一步胞浆染色效果。

5、橘黄和EA的染色效果，

由染液质量（配方、浓度、纯度）和染色时间决定。

且橘黄和EA一般都使用醇溶液，所以，此前的酒精漂洗脱水步骤也很重要。此外，温度对效果的影响也和苏木素一样。

6、酒精的浓度、纯度受温度和使用率的影响。

气温上升，会使酒精挥发——浓度下降，导致以下效果

固定效果不佳，影响染色。

脱水不彻底，影响胞浆染色；

脱水不彻底，影响二甲苯透明。

7、透明

二甲苯透明不充分，镜下观察的效果就是结构模糊——不透明、不清亮的感觉。比喻：透明良好的效果象是泡在清水中，清澈见底；

不透明或透明效果不好就象是泡在米汤或胶水中，（或是嵌在毛玻璃内），感觉模模糊糊，看不清结构。

此外，还可用石蜡油做透明剂。

8、据说：有些医院的巴氏染色效果很好，几年不褪色，而实验室的涂片最快三五个月就开始褪色。

我所知道的原因是：EA染色有问题。褪色的涂片残留的颜色为红色，而且是苏木精被还原后呈现的红色，而EA中的伊红、淡绿颜色全无；所以，应该注意：

伊红、淡绿的染色效果——包括原液的质量和配制；如酸碱度的调整；还有就是操作。

9、实验室所做大部分为妇科标本，pH值偏酸，且标本量很大，直接会影响染色的酸碱度，酒精浓度；从而影响染色效果，所以，应及时更换染液、碱水酒精，并适当调整pH值。

后记：

一个四肢健全，步姿正确的人，在平整的路上、以平稳的速度行走，若无外力影响，肯定不会摔跤。

若道路不平，人群拥挤，此人体质欠佳、姿势不良又贪图速度，就会难免受伤，乃至不能到达目的地。

走路如此；染色也是如此。

染液和漂洗液的质量如同道路的平整度；行人、步态好比操作手法。任何一个环节出现问题，都会影响最后效果。

2004年5月26日星期三