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中草药2023年12月第54卷第23期ChineseTraditionalandHerbalDrugs2023DecemberVol.54No.23·7673·
基于体外细胞模型的痹祺胶囊药效物质基础研究
宋紫腾1,2,3,卜睿臻4,韩彦琪1,2,3,王磊5,姚鹏飞1,2,3,6,许浚1,2,3,张铁军1,2,3*,刘昌孝1,2,3*
1.天津药物研究院天津市中药质量标志物重点实验室,天津300462
2.天津药物研究院中药现代制剂与质量控制技术国家地方联合工程实验室,天津300462
3.天津药物研究院药物成药性评价与系统转化全国重点实验室,天津300462
4.天津达仁堂京万红药业有限公司,天津300112
5.津药达仁堂集团股份有限公司,天津300193
6.天津中医药大学,天津301617
摘要:目的探究痹祺胶囊祛风除湿、活血止痛功能的药效物质基础。方法通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7体外炎症模型、细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-stimulatingfactor,M-CSF)与RAW264.7细胞共培养建立破骨细胞分化模型、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RA-HFLS增殖模型,分别探讨痹祺胶囊发挥抗炎活性、抑制破骨细胞形成、抑制RA-HFLS细胞增殖的作用机制及药效物质基础。MTS法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞上清中一氧化氮(nitricoxide,NO)、TNF-α和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,TRAP染色法检测破骨细胞分化数量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR法检测细胞中组织蛋白酶K(cathepsinK,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphatase,TRAP)、基质金属蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)、RANKLmRNA相对表达情况。结果痹祺胶囊及其19个单体成分均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内NO、TNF-α和IL-6的释放,推测19个化合物是痹祺胶囊发挥抗炎作用的药效物质基础。痹祺胶囊及其13个单体成分均能显著减少RANKL和M-CSF诱导RAW264.7分化为破骨细胞的数量,并能明显降低破骨细胞标志基因CTSK和TRAP的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、党参炔苷、茯苓酸、丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、藁本内酯、甘草次酸和甘草苷为痹祺胶囊发挥治疗骨破坏、缓解关节疼痛作用的主要物质基础。痹祺胶囊及其9个单体成分能明显抑制TNF-α诱导的RA-HFLS细胞增殖,并且能显著促进RA-HFLS细胞的凋亡以及明显降低MMP-3和RANKL基因的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、丹参素、丹参酮IIA、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、次黄嘌呤、甘草次酸为痹祺胶囊中发挥抑制滑膜增生作用的药效物质基础。结论通过体外细胞实验初步确定马钱子碱、士的宁、党参炔苷、白术内酯III、茯苓酸、丹参素、丹参酮IIA、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、牛膝皂苷D、次黄嘌呤、甘草次酸、甘草苷为痹祺胶囊主要药效物质基础。
关键词:痹祺胶囊;类风湿关节炎;药效物质基础;祛风除湿;活血止痛;马钱子碱;士的宁;丹参素;丹参酮IIA;阿魏酸;藁本内酯;蜕皮甾酮;次黄嘌呤;甘草次酸
中图分类号:R285文献标志码:A文章编号:0253-2670(2023)23-7673-14
DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2023.23.008
StudyonpharmacodynamicmaterialbasisofBiqiCap
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