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酶工程实验

一、选择、判断题

酶反应初速度的概念（选择、判断）

以酶反应时间为横坐标、产物生成量为纵坐标作图。与最初一段时间相适应的曲线的斜率（即酶反应的初始阶段，即底物转化量5%时的反应速度，也就是进程曲线的直线部分的斜率），就是酶反应的初速度，他可以代表酶的活性。

酸性磷酸酯酶的1个活力单位：是指在酶反应的最适条件下，每分钟生成1umol产物所需的酶量。

进程曲线：是指在酶反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量，以酶反应时间为横坐标、产物生成量为纵坐标绘制而成。

二、简答题

提取酶的方法（好像不考）

细胞破碎的方法

（1）压力破碎法

（2）珠磨破碎法

（3）超声波破碎法

（4）渗透压法

（5）有机溶剂或表面活性剂法

（6）碱或酶处理法

酶活力的影响因素

内在因素：酶的浓度、底物浓度

环境因素：pH、温度、水分活度、电解质、离子强度、抑制剂

固定化酶的方法

（1）非化学结合法：①结晶法②分散法③物理吸附法、离子结合法

（2）化学结合法：①交联法②共价结合法

（3）包埋法：①微囊法②网格法

酶失活的原因（因素）

（1）物理类：热失活、冷冻和脱水、辐射作用、机械力

（2）化学类：极端pH、氧化作用、聚合作用、表面活性剂和变性剂

（3）生物类：微生物或蛋白水解酶的作用使酶分子被水解

终止酶反应的操作（方法）（如何终止酶反应）（答4点）

（1）加终止液（如NaCO3）

（2）置于沸水浴中，加热使酶失活

（3）加强酸或强碱，使pH远离最适pH

（4）加变性试剂（乙醇、丙酮酸、丙酮等），使酶变性失活

（5）使反应液迅速冷却至10℃以下

三、论述题

分离纯化过程中防止酶失活因素（提取、纯化酶过程中注意有哪些要求和条件防止酶变性失活）

温度：为防止酶的变性失活，提取时温度不宜过高。特别是采用有机溶剂提取时，整个提取操作应尽可能在低温下进行，保持低温环境。

避免剧烈搅拌：搅拌能促进酶在提取液中的溶解，一般采用温和搅拌为宜，速度太快易产生大量气泡，增大了与空气的接触面，会引起酶蛋白的变性失活。

避免强酸强碱:大多数酶在pH4或pH10的条件下不稳定，因此要控制不要过酸或过碱，同时要避免在调整pH时产生局部酸碱过量的现象

减少泡沫形成：酶和其他蛋白质一样，常易在表面或界面处形成薄膜而变性，故在操作中应尽量减少泡沫的形成

可在提纯溶液中加一些保护剂，如少量EDTA

固定化酶的优缺点

（1）优点：

①极易将固定化酶与底物、产物分开；②可以在较长时间内进行反复分批反应和装柱连续反应；③在大多数情况下，能够提高酶的稳定性；④酶反应过程能够加以严格控制；⑤产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺；⑥较游离酶更适合于多酶反应；⑦可以增加产物的收率，提高产物的质量；⑧酶的使用效率提高，成本降低。

（2）缺点：

①固定化时，酶活力有损失；②增加了生产的成本，工厂初始投资大；③只能用于可溶性底物，而且较适用于小分子底物，对太分子底物不适宜：④与完整菌体相比不适宜于多酶反应，特别是需要辅助因子的反应；⑤胞内酶必须经过酶的分离程序。

酶制剂（生物酶）有哪些作用？（食品、医药、工业）

答：酶制剂是一种能够加速化学反应的生物催化剂，广泛应用于食品、医药、化工等领域。根据其来源和作用方式的不同，酶制剂可以分为多种类型。

（1）首先是微生物酶制剂。微生物酶制剂是从微生物中提取的酶制剂，包括细菌、真菌、酵母等。这些酶制剂具有高效、稳定、易于生产等特点，广泛应用于食品加工、制药、纺织、造纸等领域。例如，纳米酶是一种从细菌中提取的酶制剂，能够降解纤维素，广泛应用于造纸、纺织等行业。

（2）其次是植物酶制剂。植物酶制剂是从植物中提取的酶制剂，包括木瓜酶、菠萝酶等。这些酶制剂具有天然、安全、易于吸收等特点，广泛应用于食品、保健品等领域。例如，木瓜酶是一种从木瓜中提取的酶制剂，能够分解蛋白质，广泛应用于肉制品、奶制品等食品加工中。

（3）再次是动物酶制剂。动物酶制剂是从动物中提取的酶制剂，包括胃蛋白酶、胰蛋白酶等。这些酶制剂具有高效、稳定、易于吸收等特点，广泛应用于医药、保健品等领域。例如，胃蛋白酶是一种从猪胃中提取的酶制剂，能够分解蛋白质，广泛应用于消化不良、胃病等疾病的治疗中。

最后是基因工程酶制剂。基因工程酶制剂是通过基因重组技术制备的酶制剂，具有高效、纯度高、特异性强等特点，广泛应用于医药、生物技术等领域。例如，重组人胰岛素是一种通过基因重组技术制备的酶制剂，广泛应用于糖尿病等疾病的治疗中。

三种纯化酶蛋白的方法、原理（必考）

沉淀法：沉淀法的原理是通过改变某些条件、使溶液中某些溶质的溶解度降低，从而使其从溶液中沉淀析出、到达与其他溶质分离的目的。是酶蛋白分离纯化中最常用的的法。主要有盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法等。

层析法：层析法的分离原理是利用混合物中各组分的物