植物脱毒技术.pptVIP

（2）技术关键诱导再生植株的愈伤组织（3）操作程序植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出现一些变异。第30页,共50页，2024年2月25日，星期天（3）珠心组织培养脱毒法病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。目前已用该方法去除了柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒。缺点：会有20%~30%左右的变异率，同时无毒苗苗期较长。柑橘要6~8年才能结果。第31页,共50页，2024年2月25日，星期天第32页,共50页，2024年2月25日，星期天3.微体嫁接离体培养脱毒法应用微体嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。具体做法：将极小的茎尖（0.14mm~1.0mm）作为接穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起在培养基上培养。优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关第33页,共50页，2024年2月25日，星期天微体嫁接法(micrografting)脱除病毒的关键：①要求剥离技术很高②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求；③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。）第34页,共50页，2024年2月25日，星期天四、植物脱毒苗的鉴定1、视觉观察法(直接检测法)看植株的茎叶是否有该病毒所有可见症状。番茄无菌小苗厚叶莲花掌第35页,共50页，2024年2月25日，星期天植物病毒的症状植物病毒引起植株的症状是各异的，在观赏植物上由病毒引起外部症状主要有以下几种：（1）变色：褪绿、黄化、花叶、斑驳、红叶等，常见病毒有；香石竹斑驳病毒、黄瓜花叶病毒、芋花叶病毒等。（2）坏死：常见的坏死是病斑或斑点。有轮斑、环斑、条斑‘条纹等。如香石竹坏死斑点病毒、，凤仙花坏死斑点病毒草等。（3）畸形：植株可出现矮缩、矮化或叶片皱缩、卷叶、蕨叶等病状。（4）萎蔫：主要是指植物根或茎的维管束组织受到破坏而发生供水不足所出现的凋萎现象。第36页,共50页，2024年2月25日，星期天2、生物鉴定法(指示植物indicatingPlant法)由于采用汁液接种法比较困难，所以通常采用嫁接接种的方法,利用嫁接法接种，把待测的植物接种在敏感植物上，然后视其有无病斑，来判断是否脱除了病毒。指示植物接穗嫁接后的植物第37页,共50页，2024年2月25日，星期天指示植物indicatingPlant法定义:将一些对病毒敏感、症状特征显著的植物作为指示植物(又叫鉴别寄主),利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法.优点:方法简单\灵敏\准确\擦方便,仍为一种经济有效的方法缺点:枯斑法不能测出病毒总的核蛋白浓度,而只能测出相对的感染力第38页,共50页，2024年2月25日，星期天3、电子显微镜鉴定法小于0.1mm的病毒颗粒用电子显微镜直接观察经脱毒培养的叶片，检查是否有的病毒粒子存在，还可测量病毒颗粒的大小、形状和结构。较为先进的方法，但需一定的设备和技术第39页,共50页，2024年2月25日，星期天4、抗血清鉴定法利用抗原与抗体特异反应的特性，用已知病毒的抗血清来鉴定未知病毒的种类，常用的有沉淀反应法、琼脂扩散法、酶联免疫吸附法。其中酶联免役吸附反应（ELISA）是常用的一种方法。第40页,共50页，2024年2月25日，星期天特点:特异性高\测定速度快很常用抗血清的基本原理是通过植物病毒的抗原与抗体的专化结合,形成可见反应而加以判断。由于植物病毒抗血清具有高度的专化性,受体植物无论显、隐症,无论是何种传播介质,均可通过抗血清反应法准确判断病毒的存在与否,进行病毒的快速诊断。第41页,共50页，2024年2月25日，星期天五、无病毒种苗的保存、应用及繁殖（一）无病毒原种的保存获得无毒原种不易，若保存不好会很快重新感染病毒。为防止再度感染，应在隔离条件下保存。若原种保存得好，无毒原种可以利用5-10年，在生产上可以创造更多的经济效益。第42页,共50页，2024年2月25日，星期天1、隔离种植