微载体培养技术.ppt

何谓微载体？指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。原理：将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。回想一下：第32页,共52页，2024年2月25日，星期天一、微囊法（microencapsulation）:用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里，细胞不能逸出，但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜；囊内是种微小培养环境，与液体培养相似，能保护细胞少受损伤，故细胞生长好、密度高。第四章动物细胞的微囊化培养第33页,共52页，2024年2月25日，星期天图4－1微胶囊示意图微胶囊膜生物大分子代谢产物细胞营养物质第34页,共52页，2024年2月25日，星期天二、研究发展历程1、首次报道生物活性物质的微囊化研究（1957）：将酶、蛋白质和激素等生物活性物质包封在选择性透过膜中，形成球状微胶囊,称之为“生物微胶囊”。通过微胶囊膜的选择透过作用,使囊外大于某一分子量的物质不能扩散进入,而生物环境中的营养成分和囊内生物活性物质或细胞分泌的小分子产物可以自由出入微胶囊,从而达到免疫隔离目的。第35页,共52页，2024年2月25日，星期天2、“人工细胞”——“人工胰腺”80年代初,Lim等人将微囊化技术与组织细胞移植相结合,制备了海藻酸钠/聚赖氨酸(APA)微胶囊,包埋猪胰岛细胞形成“人工细胞”,并移植入糖尿病大鼠体内,结果成功地调节了血糖水平,代行了大鼠胰腺功能,因而被称为“人工胰腺”。该成果较好地解决了组织细胞移植过程的免疫排斥问题,避免或减少了昂贵的免疫抑制剂的使用,为组织细胞移植治疗神经/内分泌系统疾病提供了新思路。第36页,共52页，2024年2月25日，星期天3、90年代以来,医学界开始尝试以微胶囊作为基因重组细胞的免疫隔离和运载工具,利用重组细胞的代谢产物调节机体生理功能,治疗相关疾病。微囊化人胰岛培养15d微囊化小牛肾上腺嗜铬细胞培养10d微囊化肝癌细胞培养40d第37页,共52页，2024年2月25日，星期天4、目前，微胶囊的应用研究涉及药物控制释放、动植物细胞培养、细胞和酶的固定化以及生化物质分离等领域,已经成为材料、化学、化工、生物和医学等多学科领域工作者的研究热点。SEM下微胶囊的显微形貌×200LSCM下微胶囊表面形貌的照片第38页,共52页，2024年2月25日，星期天不同放大倍数的海藻酸钙微胶囊的SEM照片不同放大倍数的壳聚糖/海藻酸钠微胶囊的SEM照片第39页,共52页，2024年2月25日，星期天三、性质：曾是酶固定化技术中的一种（半透膜将酶包裹在球状的微囊里，酶及大分子不能从微囊里透出，而小分子物质可自由通过膜）。动物细胞微囊化后，与游离细胞相比，降低了培养时对细胞的剪切力，同时也能提供很高的细胞密度，使得产物浓度增加，纯度提高。动物细胞微囊化培养的成功为干扰素、乙肝表面抗原(HBsAg)、单克隆抗体(MAb)等的产生提供了广泛应用前景。?第40页,共52页，2024年2月25日，星期天表4－1微胶囊制备材料来源类型材料天然脂质卵磷脂、神经鞘髓磷脂等多糖海藻酸盐、壳聚糖、琼脂、淀粉等蛋白质明胶、白蛋白、纤维蛋白半合成纤维素类衍生物羧甲基纤维素钠、已基纤维素、醋酸纤维素及其酯等合成可降解型乳酸/乙醇酸共聚物、聚正酯、聚内酯、聚酐、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚氨基酸非降解型聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚酰胺、聚苯乙烯、乙烯醋酸乙酯共聚物、聚氯乙烯等第41页,共52页，2024年2月25日，星期天制备方法化学法界面聚合法、乳化法、辐射化学法物理化学法相分离法、溶剂蒸发法、界面沉积法、喷雾干燥法物理法静电沉积法、气相沉积法、流化床喷雾包衣法图2制备方法使用率比较

1－－乳化法，2－－静电法，3－－聚合法，4－－沉积法，

5－－相分离法，6－－喷雾干燥法，7－－溶剂蒸发法第42页,共52页，2024年2月25日，星期天四、微囊化培养技术要点:操作：在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊,再将微囊放入培养系统内进行培养；生长介质为1.4%海藻酸钠溶液,半透膜由多聚赖氨酸形成；培养系统可采用搅拌式或气升式反应器系统；微囊直径控制在200-400μm为宜。第43页,共52页，2024年2月25日，星期天五、动物细胞微囊化