2-酵母菌标本片的制作 ppt (1).ppt

食品微生物检验食品微生物检验技术酵母菌标本片的制作

知识目标1.熟悉酵母菌的形态及出芽繁殖方式2.了解酵母菌标本片的制作原理3.掌握制作酵母菌标本片的实验步骤素质目标技能目标1.树立食品安全社会责任感2.强化遵纪守法的法治意识3.培养严谨细致、精益求精的工匠精神4.培养团结协作，爱岗敬业职业精神5.培养规划思维和精益思维1.学会区分酵母菌死活细胞的实验方法2.协作完成酵母菌标本片的制作3.独立设计不同酵母菌标本片制作的试验方案教学目标任务目标

酵母菌的起源谈到面包，就会想到酵母，那么酵母是怎么被发现并使用的呢？要从公元前3000年说起，古埃及人最先掌握了制作发酵面包的技术。最初的发酵方法可能是偶然发现的：和好的面团在温暖处放久了，受到空气中野生酵母菌的侵入，导致发酵、膨胀、变酸，再经烤制便得到了远比“烤饼”松软的一种新面食，这便是世界上最早的面包。也是人类对酵母最早的应用。1680年，荷兰人列文虎克首次用显微镜观察到酵母，19世纪，法国科学家巴斯德首次发现酿造酒精是酵母发挥重要作用，1846年，酵母在欧洲首先实现工业化生产，20世纪80年代中期，酵母在中国实现现代化生产。

制作原理酵母菌是以出芽繁殖为主要特征的、不运动的单细胞真核微生物。其细胞核与细胞质有明显分化，个体大小比常见细菌大几倍甚至十几倍。酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖主要有芽殖，其次是裂殖与产生掷孢子和厚垣孢子；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。酵母菌的母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。知识点一

实验材料准备1.菌种啤酒酵母、假丝酵母2.培养基麦芽汁琼脂斜面试管、马铃薯葡萄糖琼脂平板、玉米粉蔗糖琼脂平板、醋酸钠琼脂斜面试管或平板（麦氏培养基）3.溶液、染色剂8.5%生理盐水、革兰氏碘液、0.05%和0.1%美蓝染色液（以pH6.0的0.02mol/L磷酸盐缓冲液配制）、5%孔雀绿染色液、95%乙醇、0.5%沙黄染色液、0.04%或0.1%中性红染色液（水溶)。4.仪器或其他用具接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、镊子、显微镜、恒温培养箱

啤酒酵母的形态观察①生理盐水浸片法：在载玻片中央加1滴无菌生理盐水，然后按无菌操作用接种环取少量啤酒酵母菌苔与生理盐水混匀，使其分散成云雾状薄层，另取一清洁盖玻片，将一边与菌液接触，以45°角缓慢覆盖菌液。先用低倍镜观察，再用高倍镜观察酵母菌的形态、大小及出芽情况。知识点二

思考：1.为什么要在载玻片中央加1滴无菌生理盐水，而不是无菌水？2.为什么要以45°角缓慢覆盖菌液？啤酒酵母的形态观察知识点二

②水-碘液浸片法：在载玻片中央加1小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。啤酒酵母的形态观察知识点二

假丝酵母的形态观察用划线法将假丝酵母接种在PDA琼脂或玉米粉琼脂培养基平板上，在划线部位加无菌盖玻片，于25-28℃培养3天，用无菌镊子取下盖玻片放于洁净载玻片上。先用低倍镜观察，再用高倍镜观察呈树枝状分枝的假菌丝形态，或打开平皿盖，在显微镜下直接观察。假丝酵母刚形成的假菌丝和出芽繁殖形成的芽体不易区别，前者由细胞伸长成圆筒形，后者从其末端部或出芽连接部出芽，当生成丝状时则较易区别。

在载玻片中央加1滴0.1%美蓝染色液，然后按无菌操作以接种环挑取少量啤酒酵母菌苔与染色液混匀，染色2~3min。另取一清洁盖玻片，将一边与菌液接触，以45°角缓慢覆盖菌液。将制片先用低倍镜，再用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，区分其母细胞与芽体，区分死细胞（蓝色）、活细胞（不着色）和老龄细胞（淡蓝色）。染色约30min后再次进行观察。用0.05%美蓝染液重复上述操作。在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5~6个视野。酵母菌死亡率一般用百分数来表示，按下列公式来计算：死亡率=死细胞总数/死活细胞总数×100%酵母菌死活细胞鉴定知识点二

取察察酵母菌死活细胞鉴定知识点二

酵母菌死活细胞鉴定知识点二

酵母菌子囊孢子的观察用接种环无菌取少许菌种啤酒酵母菌种无菌操作接种在新鲜麦芽汁琼脂斜面新鲜麦芽汁斜面25-28°培养24h连续转接种3次1.菌种活化知识点三

用接种环无菌取少许菌种活化酵母菌种无菌操作接种在麦氏琼脂斜面麦氏琼脂斜面25