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二、培养基对微生物的选择作用第31页,共45页，2024年2月25日，星期天（一）、基础知识1、纤维素与纤维素酶【案例】分解纤维素的微生物的分离纤维素是一种多糖纤维素酶是一种复合酶纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶第32页,共45页，2024年2月25日，星期天（二）、筛选1、方法：刚果红染色法原理：刚果红（CR）可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。第33页,共45页，2024年2月25日，星期天常用的刚果红染色法有两种方法一：在长出菌落的培养基上，覆盖1mg/mL的CR溶液，10—15min后，倒去CR溶液，加入1mol/L的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液。方法二：配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液，灭菌后，按照每200mL培养基加入1mL的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红第34页,共45页，2024年2月25日，星期天（1）土壤取样（2）选择培养（可省略）（3）梯度稀释（4）涂布培养（5）挑选产生透明圈的菌落（6）微生物培养（纯培养）（三）、实验流程第35页,共45页，2024年2月25日，星期天三、测定微生物的数量第36页,共45页，2024年2月25日，星期天（一）测定微生物数量的方法1.直接计数法最常用：显微镜直接计数法（方法、优点、缺点、适用条件）一、基础知识第37页,共45页，2024年2月25日，星期天2、间接计数法：最常用的是稀释平板计数法稀释平板法稀释涂布平板法稀释混合平板法第38页,共45页，2024年2月25日，星期天（一）测定饮用水中大肠杆菌的数目配制ＥＭＢ培养基倒平板接种（滤膜法）培养观察记录二、实践案例第39页,共45页，2024年2月25日，星期天1、土壤取样（二）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数2、配制培养基尿素琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基第40页,共45页，2024年2月25日，星期天第41页,共45页，2024年2月25日，星期天3、样品稀释细菌：一般选用104、105、106倍的稀释液进行培养放线菌：一般选用103、104、105倍的稀释液真菌：一般选用102、103、104倍的稀释液4、取样及平板接种（涂布平板或混合平板）第42页,共45页，2024年2月25日，星期天在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红，就可以准确的鉴定该种细菌能够分解尿素。5、培养与观察：细菌：30～370C的温度下培养1～2d；放线菌：25～280C的温度下培养5～7d；霉菌：25～280C的温度下培养3～4d。第43页,共45页，2024年2月25日，星期天当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。每克样品中的菌数＝(C/V)×MC:代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V:代表涂布平板时所用的稀释液的体积M：稀释的倍数6、细菌计数第44页,共45页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第45页,共45页，2024年2月25日，星期天关于微生物培养技术微生物非细胞生物：病毒原核生物：细菌、放线菌、支原体、立克次氏体真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）第2页,共45页，2024年2月25日，星期天菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。第3页,共45页，2024年2月25日，星期天细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。自养型:异养型:腐生菌寄生菌光合自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌第4页,共45页，2024年2月25日，星期天一、微生物的分离和纯培养（3项技术1个案例）（一）培养基配制技术（二）无菌技术（三）接种技术案例：大肠杆菌的分离和