第十三章_DNA损伤与修复（一）.pptVIP

212120**大肠杆菌的核苷酸切除修复在解链酶UvrD的作用下，ATP被水解，包含嘧啶二聚体的DNA片段发生解链而离开双螺旋，UvrC也随之而去；最后，DNA聚合酶I或II填补空缺；DNA连接酶则缝合切口。人类的DNA损伤核苷酸切除修复①首先由损伤部位识别蛋白XPC和XPA等，再加上DNA复制所需的SSB，结合在损伤DNA的部位；②XPB、XPD发挥解旋酶的活性，与上述物质共同作用在受损DNA周围形成一个凸起；③XPG与XPF发生构象改变，分别在凸起的3′-端和5′-端发挥核酸内切酶活性,在增殖细胞核抗原（PCNA）的帮助下，切除并释放受损的寡核苷酸；④遗留的缺损区由聚合酶δ或ε进行修补合成；⑤最后，由连接酶完成连接。两类碱基切除修复

-全局性基因组NER和转录偶联性NER全局性基因组NER（GGR）负责修复整个基因组的损伤，速度慢，效率低。转录偶联性NER（transcription-coupledrepair，TCR）专门负责修复那些正在转录的基因在模板链上的损伤，速度快，效率高。两类NER的主要差别在于识别损伤的机制上，至于损伤识别以后发生的修复反应并无本质上的不同。TCR由RNA聚合酶识别损伤，当RNA聚合酶转录到受损伤部位而前进受阻的时候，TCR系统即被起动。全局性NER和转录偶联性NER碱基错配修复（mismatchrepair，MMR）错配是指非Watson-Crick碱基配对。碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正：①复制与重组中出现的碱基配对错误；②因碱基损伤所致的碱基配对错误；③碱基插入；④碱基缺失。MMR系统主要用来修复DNA分子上错配碱基对，此外，还能修复一些因“复制打滑”而诱发的核苷酸插入或缺失损伤。错配修复系统必须能够保证只会将子链上错误的碱基切除，而不会把母链中本来就正确的碱基切除。大肠杆菌的MMR系统的确就是利用甲基化来区分子链和母链的，因此，大肠杆菌内修复复制中产生的错配碱基的系统又称为甲基化导向的错配修复。至于其它细菌和真核细胞如何区分子链和母链的尚不清楚。碱基错配修复（mismatchrepair，MMR）（1）首先由MutS识别并结合除了C-C以外的错配碱基对，MutL随后结合；（2）在错配碱基对两侧的DNA通过MutS作相向移动；（3）MutH与MutL和GATC位点结合；（4）MutH的核酸内切酶活性被MutS/MutL激活，在非甲基化GATC的5′-端切开子链；（5）UvrD作为解链酶，催化被切开的含有错配碱基的子链与母链的分离，SSB则与母链上处于单链状态的区域结合。MutH的切口位于错配核苷酸的5?侧，使用外切酶Ⅶ或RecJ，按5??3?方向降解DNA；切口位于错配的3’侧，则使用外切酶Ⅰ，按3??5?方向降解DNA。（6）最后，DNA聚合酶III和连接酶分别进行缺口的修复合成和切口的缝合。Dam甲基化酶（methylase）使E.coli处于暂时的半甲基化状态，标记母链和新合成的DNA链，帮助新合成的DNA链被错配修复系统识别并修复。模板链的GATC序列甲基化MutH仅切割新合成的DNA链MSH（MutShomologs）蛋白与MutL同源的MLH和PMS蛋白真核细胞错配修复系统无MutH，也无半甲基化标记母链。错配修复系统利用冈崎片段连接前的DNA缺口辨别错配碱基所在的DNA链。真核细胞核苷酸修复错配系统：参与错配修复的蛋白质和酶的名称和功能大肠杆菌酵母哺乳动物大肠杆菌中蛋白质的功能MutSMsh2,Msh6,Msh3Msh1（线粒体）Msh4，Msh5（减数分裂重组）Msh2,Msh6,Msh3不明Msh4，Msh5（减数分裂重组）识别错配碱基，具有弱的ATP酶活性。MutLMlh1Pms1Mlh2,Mlh3Mlh1Pms2Pms1调节MutS和MutH之间的相互作用，与UvrD作用。MutH不明不明结合半甲基化的GATC位点，序列和甲基化特异性内切酶，剪切非甲基化GATC的5′-端。UvrD不明不明解链酶II，催化被切开的含有错配碱基的子链与母链的分离。遗传性非息肉病性结直肠癌遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditarynonpolyposiscolorectalcancer,HNPCC)是一种呈常染色体显性遗传的家族性肿瘤综合征，又称lynch（林奇）综合征。家族中异常基因携带者早期发生结直肠癌（平均年龄44岁），多为右侧结肠癌，同时性和异时性多原发癌也较多见，子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌等其它部位的恶性肿瘤亦明显高于正常