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取10％甘油中保存的菌种（DH5α）在LB培养基上划线，37℃
挑单菌落接种于3mlLB培养基中，37℃
取0.5ml过夜培养的菌液，转接入50ml的灭过菌的LB液体培养基中(1:100稀释)，37℃振荡培养，使菌液的OD600
4℃，6000g
加入10ml冰预冷的0.1MCaCl2,冰上放置20min，
4℃，6000g
加入1－2ml冰预冷的0.1MCaCl2重悬菌体，4℃
加10-15%的甘油,每管100－200μl分装，然后－70℃
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