基因工程和蛋白质工程公开课.ppt

2.蛋白质工程的应用①提高蛋白质的稳定性（T4溶菌酶）—S—S—T4溶菌酶第60页,共61页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第61页,共61页，2024年2月25日，星期天*师：我们先来看一下基因工程的定义。给大家3分钟时间，阅读第5页基因工程的定义。一会儿找同学来填填空。*师：通过定义，我们知道基因工程的操作对象是（基因），它是在体内还是体外操作？将两种生物的基因组合起来，这叫基因突变，重组还是染色体变异？目的就是定向改变生物的遗传性状。比方说有同学嫌自己个头矮，想长个儿，用基因工程啊，把长颈鹿的长脖子基因提取出来，放到我的细胞里，这不就定向改造自己的遗传性状了嘛。*师：学习完定义，有同学可能有疑问了，长颈鹿和人是两个物种，怎么能把这两种基因组合起来呢？就算组合起来了，长颈鹿的基因怎么能在人体内表达呢？*师：想长高的关键，是先把长颈鹿的长脖子基因切下来，再把这个目的基因缝到人身上去。这就涉及到基因工程的工具，我们先来看一下基因工程的剪刀，限制性内切酶。给大家两分钟时间，阅读课本第三页的资料1，一边阅读，一边思考两个问题，限制性内切酶主要存在于什么生物中？它的特点又是什么？生：师：限制性内切酶是主要是微生物体内的一类酶，有400多种，主要的作用是切割外来的DNA分子，因为切割的部位是DNA内部，所以叫限制性内切酶。......由此说明酶的专一性。*师：下面通过一个动画看一下限制性内切酶的是怎么切割DNA的。这是大肠杆菌体内的一种限制性内切酶，它特异性的识别GAACCT序列，并在特异性的切断GA之间的键。被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。*师：这是粘质沙雷菌体内的一种限制酶，它特异性识别GGCC序列，并切断GC之间的键。但这种限制酶切开的DNA没有伸出核苷酸，是平末端。通过动画我们知道限制酶可以特异性切断某些碱基之间的键，他切断的是什么键？**师：思考两个问题，比方说我们想把长颈鹿的长脖子基因切下来，需要用限制酶切几个切口？产生几个黏性末端？我们用同种限制酶切割不同种生物的DNA，获得的黏性末端一样吗？如果是不同的限制酶呢？*师：来看大屏幕，这是两种生物的不同基因，我们用相同的限制酶切割，同种限制酶会识别相同的DNA序列，切割相同位点，这样就得到了相同的黏性末端，如果我们将不同来源的DNA混合，它们能不能配对连接呢？师：当然可以，但是要想连接，还需要另一种酶也就是基因工程的针线，DNA连接酶*师：给大家两分钟时间阅读资料2，一边阅读一边思考T4连接酶是通过连接什么键连接DNA片段的？*师：我们简单了解一下DNA连接酶的类型*师：讲到这里，大家回忆一下我们之前学的DNA聚合酶，它跟DNA连接酶一样吗？有什么异同呢？*师：并不是说把目的基因切下来直接导入就可以表达了，因为很多外来DNA一旦进入人体，就会被酶分解，无法保留。所以基因工程还需要特殊的运载体。常见的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒等。最常用的载体是质粒。它是细菌细胞中一种小型环状DNA分子。具有自我复制的能力。也具有限制酶的专一的酶切位点。从图上看，质粒上往往存在某些标记基因，标记基因有什么作用？如果想将目的基因与质粒结合，几种限制酶和几种连接酶处理呢？*载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。**师：下面我们来看一下基因工程的基本操作程序：比如说这就是长颈鹿的体细胞，我们首先要提取目的基因，从细胞内提出DNA，用限制性内切酶切出长脖子的基因，然后将目的基因与运载体结合，构建基因表达载体，从细菌内提取出质粒来，用同一个限制性内切酶把质粒切出一个切口，然后用DNA连接酶将目的基因与质粒缝起来。第三步将重组载体导入受体细胞，最后检测目的基因是否表达出来。*师：下面我们详细看一下具体操作步骤第一步是获取目的基因，比方说我想让大肠杆菌生产胰岛素，那么胰岛素基因就是目的基因。获取目的基因的方法大体有三种，我们分别来介绍一下。*师；第一种方法是从基因文库中获取目的基因。这里涉及到一个概念，什么叫基因文库，简而言之就是某种生物的各种各样的基因的总和。基因文库就好比图书馆一样，每个基因就好比一本书，我想要什么基因，就从这个图书馆里查，找出来就可以。图书馆有大有小，基因库也是这样，包含一种生物全部基因的叫做基因组文库，只包含部分基因的我们叫做部分基因文库，也叫cDNA文库。*师：那么这么庞大的基因文库是如何构建的呢？我们简单了解一下。