酶学与酶工程第五章酶分子修饰学生.ppt

第五章酶分子修饰1精品医学ppt

通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。包括物理修饰、化学修饰，分子改造等2精品医学ppt

一、酶修饰的作用1.稳定酶的天然构象与增强耐热性2．保护酶活性部位与抗抑制剂3．维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶4．降低酶的抗原性及稳定酶的微环境5．改变酶学性质第一节概述3精品医学ppt

二、酶修饰的方法化学修饰酶改造的分子生物途径酶分子的物理修饰4精品医学ppt

一、酶分子化学修饰的一般问题酶分子的化学修饰对酶结构与功能、酶的催化机制等酶学研究方面有着重要作用，而在酶工程中所运用的修饰方法与基础研究的要求有所不同。1．选择酶分子修饰剂理想的修饰剂是选择性高、在温和反应条件下能进行修饰反应、被修饰的功能基在温和条件下能再生。第二节酶分子的化学修饰5精品医学ppt

①能选择性地与一个氨基酸残基反应；②反应在保证酶蛋白不变性的条件下进行；③被标记的残基在酶中稳定，容易通过降解分离出来并鉴定；④反应程度能用简单的技术测定。6精品医学ppt

选择修饰剂时要考虑几点：①修饰剂的相对分子质量、修饰剂链的长度对蛋白质的吸附性；②修饰剂上反应基团的数目及位置；③修饰剂上反应基团的活化方法与条件。7精品医学ppt

2．选择反应条件①反应体系中酶与修饰剂的分子比例；②反应体系的溶剂性质、盐浓度和pH条件；③反应温度及时间。3．修饰剂的活化活化基团才能在一定条件下与酶分子的某侧链基团进行反应8精品医学ppt

4．修饰将带有活化基团的大分子修饰剂与经过分离纯化的酶液，以一定的比例混合，在一定的温度、pH值等条件下反应一段时间，使修饰剂的活化基团与酶分子的某侧链基团以共价键结合，对酶分子进行修饰。5．分离需要通过不同的方法进行分离，将具有不同修饰度的酶分子分开，从中获得具有较好修饰效果的修饰酶。9精品医学ppt

二、金属离子置换修饰把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法成为金属离子置换修饰。金属离子置换修饰的方法：酶的纯化、去除原有的金属离子、加入置换离子金属离子置换修饰的作用：十一次课10精品医学ppt

三、酶分子侧链基团修饰功能基团主要有氨基、羧基、巯基．咪唑基、吲哚基、酚羟基、羟基、胍基、甲硫基酶侧链基团的修饰方法很多，主要有氨基修饰、羧基修饰、巯基修饰、酚基修饰、胍基修饰、咪唑基修饰、吲哚基修饰及分子内交联修饰等11精品医学ppt

各种氨基酸侧链的修饰剂氨基酸侧链基团修饰剂Lys氨基三硝基苯磺酸，2，4－二硝基氟苯、碘乙酸、碘乙酰胺、丹磺酰氯、亚硝酸Asp、Glu羧基水溶性碳化二亚胺Arg胍基苯乙二醛，1,2－环己二酮、丁二酮Cys巯基碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺二硫键巯基乙醇、DTTHis咪唑基焦碳酸二乙酯、碘乙酸Tyr酚羟基碘、四硝基甲烷Trp吲哚基N-溴代琥珀酰亚胺12精品医学ppt

四、大分子结合修饰利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法称为大分子结合修饰法，简称为大分子结合法。大分子结合修饰是目前应用最广的酶分子修饰方法，通常使用的水溶性大分子修饰剂有：右旋糖酐，PEG、肝素、蔗糖聚合物、聚氨基酸等。13精品医学ppt

使用一些能与酶非共价地相互作用而又能有效地保护酶的一些添加物，如聚乙二醇、右旋糖苷等，它们既能通过氢键固定在酶分子表面，也能通过氢键有效地与外部水相连，从而保护酶的活力。一些添加物，如多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺等能通过调节酶的微环境来保护酶的活力。另一类添加物就是蛋白质。蛋白质分子之间相互作用时，其表面区域内排除了水分子，因而增加了相互作用力，其稳定性也就增加了。非共价修饰14精品医学ppt

用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通过共价键连接于酶分子的表面，形成一层覆盖层。例如：用聚乙二醇修饰超氧物歧化酶，不仅可以降低或消除酶的抗原性，而且提高了抗蛋白酶的能力，延长了酶在体内的半衰期从而提高了酶药效。每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可以使酶活力提高到原有酶活力的2.25倍；每分子胰凝乳蛋白酶与11分子右旋糖酐结合，酶活力达到原有酶活力的5.1倍共价修饰15精品医学ppt

大分子修饰(共价)的过程修饰剂的选择：大分子结合修饰采用的修饰剂是水溶性大分子。例如，聚乙二醇（PEG）、右旋糖酐、蔗糖聚合物（Ficoll）、葡聚糖、环状糊精、肝素、羧甲基纤维素、聚氨基酸等。要根据酶分子的结构和修饰剂的特性选择适宜的水溶性大分子。(均相反应,无毒害)修饰剂的活化：作为修饰剂中含有的基团往往不能直接与酶分子的基团进行反应而结合在一起。在使用之前一般需要经过活化，然后才可以与酶分子的某侧链