外源基因转移的细胞学方法和分子方法.ppt

一、原理农杆菌是一种革兰氏阴性土壤杆菌，它们侵染植物后能诱发植物形成肿瘤。从一种致癌的农杆菌中分离出了一种巨大质粒（约200Kb），称为致癌质粒，简称Ti质粒。Ti质粒上有一段DNA被称为转移DNA（简称T－DNA），能转移并整合到植物染色体上，其上携带的基因能在受体细胞中表达。Ti质粒随后被改造用作人工植物基因工程的载体。这种利用农杆菌的遗传转化体系，将外源目的基因或DNA片段插入Ti质粒的T－DNA中，并随之导入受体植物细胞，而获得转基因植株的方法，即为农杆菌介导法。第一节??????农杆菌介导法第21页,共28页，2024年2月25日，星期天Ti质粒的必需组成元件，包括T－DNA区域和致毒基因(Virgene)TDNA是Ti质粒中唯一能够与植物染色体整合的序列，而致病区中的一系列基因则起着辅助整合的作用。与冠瘿碱生成有关的是Vir区和T-DNA区，植物体内不能合成冠瘿碱，冠瘿碱的合成为农杆菌的生长提供了必要的碳源和氮源。第22页,共28页，2024年2月25日，星期天第二节??????基因枪法基因枪法又称微弹轰击法、粒子轰击法、高速粒子喷射技术、弹道微靶点射击，是一种借助高速金属微粒将DNA分子引入活细胞的转化技术。第23页,共28页，2024年2月25日，星期天原理基因枪技术的基本原理是利用火药爆炸、高压放电或高压气体作驱动力，将载有外源DNA的金（或钨）粉等金属微粒加速，射入受体细胞或组织，从而达到将外源DNA分子导入细胞中的目的。第24页,共28页，2024年2月25日，星期天第三节??????聚乙二醇法基本原理聚乙二醇（PEG）是一种选择性化学渗透剂，它可以使细胞膜之间或使DNA与细胞膜之间形成分子桥，促使相互间的接触和粘连，并通过改变细胞膜表面的电荷，引起细胞膜透性变化，从而促进外源大分子进入原生质体，因此称之为PEG诱导法。第25页,共28页，2024年2月25日，星期天第四节??????花粉管通道法一、基本原理在受精及胚胎发育的初期是植物接受远缘遗传物质的敏感时期，就生殖细胞的结构而言，在胚囊中的精、卵细胞类似天然的原生质体；而且在精子入卵时，卵膜有一个开闭的过程；即使到了合子期，胞壁的形成也尚未完备，胞壁的屏障作用还很小，因此外源基因进入受体卵细胞及合子的阻力较小。第26页,共28页，2024年2月25日，星期天在花粉管伸入胚珠的过程中可形成花粉管通道，这为外源DNA分子进入胚囊提供了天然的途径。植物授粉后外源DNA能沿着花粉管渗入，经过珠心通道进入胚囊，转化尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎。第27页,共28页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第28页,共28页，2024年2月25日，星期天外源基因转移的细胞学方法和分子方法首先可以通过引种解决本地区的虫害、环境胁迫造成产量下降的问题。其次选择抗性好的品种做亲本，与农艺性状较好的亲本杂交，选择农艺性状和抗性均较好的后代推广。（品种间杂交，杂种优势利用）远缘杂交（染色体工程）诱变育种生物技术育种：组织和细胞培养技术，细胞融合技术，外源DNA导入等。小麦抗病虫育种和抗环境胁迫育种的主要方法第2页,共28页，2024年2月25日，星期天要将野生亲缘和潜在于更远缘物种的异源遗传物质转移到栽培小麦中可以用两种主要方法：细胞遗传学操纵（染色体工程)和分子技术（遗传工程)。外源基因导入小麦的两种方法第3页,共28页，2024年2月25日，星期天什么是染色体工程？植物染色体工程的用途很广,其中最重要的是基因定位和异源基因的导入。用导入异源基因改良现有小麦品种是小麦育种的重要方向之一。通过染色体工程有效地转移外源基因,并创造在育种中可利用的种质材料,大致经过以下步骤:种间或属间杂交→F1或产生双二倍体→异附加系→异代换系→易位系。其中异附加系、异代换系和易位系统称为异染色体系,易位系的育种利用价值最高。第4页,共28页，2024年2月25日，星期天双二倍体是染色体工程中的重要基础材料,在其和小麦的回交后代中可以得到小麦的二体异附加系。二体异附加系是获得代换系、端体附加系和易位系的基础,易位系是把带有目的基因的异源染色体片段整合到小麦染色体上的材料。第5页,共28页，2024年2月25日，星期天整条染色体的细胞遗传学操纵

附加系细胞中添加异种染色体的系统称异附加系。培育此添加系统的方法多种多样,常规法、桥梁亲本法、单倍体法、双二倍回交法、双重单体或多重单体附加法等均能创造异附加系。其中,最常用的方法是获得栽培物种与亲缘物种间的杂种F1后,用