分子发光分析.ppt

*三、特点characteristics1.灵敏度极高例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光分析，可测定2?10-17mol/L的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含量2.仪器设备简单不需要光源、单色器和背景校正；3.发射光强度测量无干扰无背景光、散射光等干扰；4.线性范围宽5.分析速度快缺点：可供发光用的试剂少；发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）；机理研究少。第53页,共56页，2024年2月25日，星期天*本章小结一.荧光与磷光的产生辐射跃迁：荧光及磷光;非辐射跃迁：振动弛豫，系间窜越，内转换，外转换；激发光谱与发射光谱;荧光量子产率荧光效率与物质分子结构的关系：跃迁类型，共轭效应，刚性平面结构，取代基效应;荧光效率与环境因素的关系：溶剂，温度，pH。第54页,共56页，2024年2月25日，星期天*二.荧光与磷光分析法仪器结构：两个单色器，光源与检测器成直角定量依据与方法：If=Kc,Ip=Kc应用：定量，有机，无机三.化学发光分析化学发光的产生化学发光效率φcl=φr·φf总发光强度与浓度的关系：A=φcl·c=Kc化学发光装置发光反应室－光检测器－信号放大－显示本章作业：p65：1，2，4三大题。第55页,共56页，2024年2月25日，星期天*感谢大家观看第56页,共56页，2024年2月25日，星期天*第21页,共56页，2024年2月25日，星期天*四、影响荧光强度的环境因素

relationbetweenfluorescenceandmolecularstructure影响荧光强度的外部因素1.溶剂的影响由于溶质分子与溶剂分子间的作用，使同一种荧光物质在不同的溶剂中的荧光光谱的位置和强度都会有显著的不同如8-巯基喹啉在下列四种不同极性溶剂中的情况溶剂介电常数荧光峰λ/nm荧光效率四氯化碳2.243900.002氯仿5.23980.041丙酮21.54050.055乙38.84100.064第22页,共56页，2024年2月25日，星期天*2.温度的影响荧光强度对温度变化敏感，一般来说，溶液的荧光强度随着温度升高而降低。3.溶液pH带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光一般都与溶液的pH有关，因此在荧光分析中要严格控制溶液的pH值。如苯酚在酸性溶液中呈现荧光，但在碱性溶液中，无荧光再如苯胺在pH7～12溶液中有蓝色荧光，而在pH小于2大于13的溶液中都不发荧光。另外金属离子与有机试剂形成的发光螯合物也受到溶液的pH影响第23页,共56页，2024年2月25日，星期天*4.内滤光作用和自吸收现象自吸收现象：化合物的荧光发射光谱的短波长端与其吸收光谱的长波长端重叠，产生自吸收；如蒽化合物。内滤光作用：溶液中含有能吸收激发光或荧光物质发射的荧光的物质，就会使荧光减弱，这种现象称为“内滤光作用”，如色胺酸中的重铬酸钾；第24页,共56页，2024年2月25日，星期天*5.溶液荧光的猝灭荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。能引起荧光强度降低的物质称为猝灭剂。（1）碰撞猝灭M+hγ—M*,M*+Q—M+热（2）静态猝灭M+Q—MQ非荧光（3）转入三重态的猝灭三重态O2（4）发生电子转移反应的猝灭M+Q—发生电子转移（5）荧光物质的自猝灭荧光物质浓度较高第25页,共56页，2024年2月25日，星期天*第四章

分子发光分析法一、仪器与结构流程instrumentandgeneralprocess二、荧光分析法和应用fluorescenceanalysisandapplication三、磷光分析法及应用phosphorescenceanalysis