兽用疫苗生产与检验技术.ppt

◆2008年1月1日起，农业部将对GMP疫苗生产企业疫苗菌(毒)种制备与鉴定、活疫苗生产以及疫苗检验使用无特定病原体(SPF级)鸡、鸡胚情况进行全面监督检查。对达不到标准要求的，将根据《兽药管理条例》规定进行处理。《农业部关于加强兽用生物制品生产

检验原料监督管理的通知》

(2006.11.22农医发[2006]l0号令)第77页,共110页，2024年2月25日，星期天血清、化学试剂和生物制剂细胞培养用血清能提供人工合成培养液必须的物质，对细胞附着和保护有明显的作用，各种动物的血清都能应用，实验室常用新生犊牛血清，既可大量采集，又有良好的细胞培养效果。也可应用马血清、大牛血清、绵羊血清或鸡、兔血清等。用成年动物血清培养细胞，效果大都不如犊牛血清，常含有抗病毒抗体或其它抑制病毒的物质，抑制病毒的生长。3）其它原材料第78页,共110页，2024年2月25日，星期天1）制苗用菌液的制备液体培养基按培养基量的一定比例接入二级种子菌液，在37?C左右摇动培养或通气培养，当菌液混浊或pH下降时，停止培养，冷却后收获菌液或离心后收获菌泥，适当稀释后置2—8?C保存备用。固体培养基培养时，将检验合格的二级种子接种于琼脂培养基上布匀，置适宜的温度下培养一定时间，经检查合格后加入稳定剂将菌苔洗下，过滤，2—8?C静置沉淀。2）制苗用病毒液的制备将一定量的生产毒种接种动物、组织、鸡胚或细胞，每天观察接种动物的反应，接种鸡胚的观察鸡胚的死亡或感染情况，接种细胞的既可静止培养，也可转瓶培养，每天观察细胞病变，待病毒繁殖充分后收获含毒器官、组织或含毒细胞液，收获的含毒组织或细胞液。3、疫苗原液的繁殖第79页,共110页，2024年2月25日，星期天1）液体（湿）苗的配制疫苗原液或半成品检验合格后，将菌（毒）液混合，按规定头份定量分装，每头份疫苗不得低于规定的最低标准。2）冻干苗的配制按疫苗原液量加入一定比例的保护（稳定）剂，病毒性组织苗需预先制成乳剂后，加入一定比例的保护（稳定）剂，充分混合后，按规定头份定量分装，分装过程中应随时振摇，分装结束后迅速进行冷冻真空干燥。冻干后在真空状态下在冻干柜内自动压塞，出箱后压上铝帽。4、疫苗配制与冻干第80页,共110页，2024年2月25日，星期天1）冻干疫苗保护剂（稳定剂）防止疫苗在冻干过程中活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶；保护微生物中活性物质的活性与抗原性；降低细胞内外的渗透压差；保持弱毒疫苗中微生物在干燥状态下的活力和复苏时迅速恢复活力；对疫苗的免疫效果无影响；对微生物的保护性能（尤其是耐热性能）良好；冻干产品的物理性状（外观、色泽、溶解性等）符合要求。常用的有：5%蔗糖（乳糖）脱脂乳、明胶蔗糖、40%蔗糖明胶、聚乙烯吡咯烷酮乳糖和SPGA。2）液体疫苗保护剂甘油甘油作为保护剂广泛用于活疫苗，如50％甘油盐水，可以杀灭大多数细菌，而病毒却可存活二甲基亚砜（DMSO）二甲基亚砜可以减少冷冻过程中微小冰晶的形成，因而保护冷冻的病毒。5、疫苗保护剂第81页,共110页，2024年2月25日，星期天

不同微生物保护剂的主要成分

微生物类型冻干保护剂主要成分细菌10%蔗糖、5%蔗糖脱脂乳、5%蔗糖、1.5%明胶；10—20%脱脂乳、含1%谷氨酸钠的10%脱脂乳；5%牛血清白蛋白的蔗糖；灭活马血清等厌氧菌含0.1%谷氨酸钠的10%脱脂乳，10%脱脂乳，7.5%葡萄糖血清等病毒常用下列物质的不同浓度或按不同比例混合组成冻干保护剂：明胶、血清、谷氨酸钠、羊水、蛋白胨、蔗糖、乳糖、山梨醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、水解乳蛋白、乳酸钙、海藻糖、硫脲等支原体50%马血清、1%牛血清白蛋白、5%脱脂乳、7.5%葡萄糖马血清等立克次体10%脱脂乳酵母菌马血清或含7.5%葡萄糖马血清、含1%谷氨酸钠的10%脱脂乳等第82页,共110页，2024年2月25日，星期天1、疫苗质量中问题弱毒活疫苗：冻干保护剂；毒力偏强；外源病原污染。灭活疫苗:抗原繁殖、浓缩和纯化技术落后，抗原纯度不够，副反应太大；油佐剂灭活苗稳定性差，副反应大；免疫效果差。（三）疫苗质量改进新技术第83页,共110页，2024年2月25日，星期天1）分子设计与基因工程技术亚单位疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗、DNA疫苗转基因植物疫苗等。2）抗原缓释技术将抗原制成聚合物，增加抗原效能、延长疫苗免疫期。3）新型免疫佐剂减少副反应，提高细胞免疫调节作用。4）新型生物发酵技术传统的生物发酵罐变为生物反应器，实现了程序化操作。5）现代细胞