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E3连接酶Pirh2在多发性骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用及其机制研究中期报告

中期报告：E3连接酶Pirh2在多发性骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用及其机制研究

项目背景

多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma,MM)是一种恶性肿瘤，其主要特点是骨髓中恶性浆细胞增生和大量分泌单克隆免疫球蛋白(Mprotein)。硼替佐米(Bortezomib,Velcade)是MM治疗中的一种重要药物，作用机制是通过抑制蛋白酶体的功能，抑制癌细胞的增殖和生存。然而，由于长期使用和某些细胞内生物学机制，患者可能会产生耐药性，导致药物失效。因此，寻找新的治疗靶点和策略是MM治疗中亟待解决的问题。

项目目的和意义

本项目旨在研究E3连接酶Pirh2在MM细胞硼替佐米耐药中的作用及其机制，探索Pirh2是否作为MM耐药治疗靶点的潜力。研究结果不仅可以深入了解MM细胞的生物学特性，更可以为MM耐药治疗和新药研发提供新的思路和策略。

研究方法

实验室采用人MM细胞系U266和RPMI8226，通过MTT法检测不同浓度的硼替佐米和Pirh2-knockdown或overexpression对细胞增殖的影响；Westernblot法检测Pirh2-knockdown或overexpression对下游分子的表达水平和蛋白酶体活性的影响；荧光定量PCR法和ChIP法检测Pirh2对目标基因的转录水平和启动子活性的影响。

研究进展和成果

目前，实验室已完成以下工作：

1.确定不同浓度的硼替佐米对U266和RPMI8226细胞增殖和蛋白酶体活性的抑制效应，并筛选出适宜的实验浓度；

2.成功建立Pirh2敲低和过表达的细胞模型，证实Pirh2敲低可以增强细胞对硼替佐米的敏感性，而Pirh2过表达则可以降低细胞对硼替佐米的敏感性；

3.检测Pirh2敲低对下游分子以及Pirh2过表达对蛋白酶体活性的影响，并初步确定相关的信号通路；

4.开展Pirh2对MM细胞中耐药基因启动子活性的影响的研究。

下一步工作

本项目的下一步工作将是探究Pirh2对靶基因的直接或间接作用机制，确定Pirh2在耐药发生和发展中的重要性，以及开发Pirh2为治疗MM耐药的新靶点和策略。