关于冷沉淀制备方法及质量影响因素.docx

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关于冷沉淀制备方法及质量影响因素

【关键词】冷沉淀;制备;质量

冷沉淀是用新鲜冰冻血浆为原料制备的一种成分血,主要用于血友病甲、血管性血友病、纤维蛋白原缺乏症患者,也可用于手术后出血、严重外伤及DIC等[1]。因冷沉淀中的Ⅷ因子为不稳定因子,受多种因素影响,所以每袋冷沉淀Ⅷ因子含量各不相同,现将本中心的冷沉淀制备方法及质量因素影响分析汇报如下。

1材料与方法

1.1材料与仪器

大容量低温离心机(CrYOFUge6000),日本日立公司生产的速冻冰箱(SanYO),美国CYTOTHERM公司生产的CT-4T.6C型自动摇摆式恒温水浴溶化箱,日本产SYSMaX(CA-50)凝血因子分析仪,韩国产热合机(SE250)。

1.2冷沉淀原料浆制备

采用费森尤斯卡比(广州)生产的密闭四联袋,采集400ml全血6h内离心分离制成血浆60袋(200±10ml),将血浆迅速置-80℃速冻机内,冻结后置-30℃冰箱备用。

1.3制备冷沉淀

取60袋血浆置室温中放置3min,待连接两袋的塑料管变软后分两组(A、B)放入低温水浴箱中(4℃~6℃),A组30袋用水浴虹吸法制备冷沉淀,B组30袋用快速溶化离心法制备冷沉淀,计时。A组新鲜冰冻血浆融化时固定于恒温摇摆式水浴箱的血袋夹中,垂直浸没于恒温的循环水浴中,水浴箱自动摇摆,血浆溶化,上清液虹吸流入空袋,袋中心剩余(25±5)ml未溶化的血浆及吸附在上面的冷沉淀。B组新鲜冰冻血浆融化时去掉固定夹,融化过程中人工给力捏碎血浆冰块,血浆溶解到尚存少许冰碴后,用大容量低温离心机离心,温度4℃,相对离心力3200g,离心20min,分离血浆,袋内存留(25±5)ml血浆冷沉淀,将A、B组冷沉淀快速置于速冻冰箱中冻结。A组平均用1.2h,B组平均用2.0h。

1.4质量检测

用血凝仪对不同方法制备的冷沉淀进行凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原的测定,t检验分析。

2结果

用相同的溶化设备,采用不同制备方法制备所得冷沉淀质量有差异,见表1。结果显示:快速溶化离心法每袋中凝血因子Ⅷ80IU,纤维蛋白原150mg,符合国家标准[1],水浴虹吸法凝血因子Ⅷ≥80IU,符合国家标准,纤维蛋白原150mg,不符合国家标准[1]。表1冷沉淀质量检测结果

3影响冷沉淀质量的关键因素

冷沉淀制备经历了全血、新鲜冰冻血浆、冷沉淀三个阶段,有些可控,有些不可控,任何一个环节的误差都会影响冷沉淀的质量。

3.1采集个体

冷沉淀中凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原的收集率与献血者个体有关。正常个体中凝血因子Ⅷ水平相差在50%~200%之间;与血型有关;O型含量最少,已知服用一些药物如避孕药可增加凝血因子Ⅷ水平,血管作用肽1-脱氨-8-D精氨酸血管加压素(DDAVP)可增加血循环中凝血因子Ⅷ水平达300%[2]。

3.2采集速度

血液采集过程中应注意采集速度,要求200ml全血采集时间3min,400ml全血采集时间6min,如采血不畅,出现凝块及溶血均会影响全血中冷沉淀凝血因子Ⅷ的含量。

3.3制备过程

冷沉淀中的主要成分凝血因子Ⅷ是一种不稳定的凝血因子,新鲜冰冻血浆的溶化温度直接影响产品质量,在4℃~6℃水浴中溶化回收率较高,在8℃以上产生自溶。快速溶化离心法制备冷沉淀的质量优于水浴虹吸法,分析原因,前者在于溶化新冰时人工捏碎血浆冰块,加快溶化速度,再通过低温重离心,使新鲜冰冻血浆中90%的冷沉淀沉淀在浆袋底部,流失少;而水浴虹吸法在虹吸过程中,一部分凝血因子及纤维蛋白原也随血浆进入空袋。

4讨论

近几年,由于成分输血的大力推广及凝血因子制品的缺乏,我市各医院冷沉淀用量明显增多,不仅用于治疗血友病A,在烧伤外科手术止血、产后大出血、外伤、DIC治疗中起到关键作用。制备冷沉淀时,要控制各环节影响因素,在把握好水浴温度和溶化速度这两个关键点的同时,采用快速溶化离心法制备冷沉淀,临床疗效会更好。

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