高效液相色谱法（一） (1).pptx

高效液相色谱法（一）主讲人：黄小忠

高效液相色谱法是以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法，与气相色谱法相比具有的优点：不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般在啊室温下分析即可，不需高柱温缺点：分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长

目录HPLC的主要类型及选择01高效液相色谱仪02高效液相色谱的基本理论和实验技术03

类型液-固吸附色谱液-液分配色谱键合相色谱凝胶色谱离子交换色谱HPLC主要的类型HPLC的主要类型及选择

各组分吸附能力的差异进行混合物分离的基本原理选择原则：“相似相溶”原则各种不同极性的一元或多元溶剂流动相（也称洗脱液）为固体吸附剂分为极性固定相和非极性固定相固定相（1）分离极性不同的化合物；（2）分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品（3）分离异构体应用流动相为液体，固定相为固体吸附剂1、液-固吸附色谱

利用组分在两相中溶解度的差异基本原理正相色谱：固定液极性流动相极性反相色谱：固定液极性流动相极性分类对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即正相；反之即反相流动相早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用固定相既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物应用固定相与流动相均为液体（互不相溶）2、液-液分配色谱

反相键合相色谱键合固定相极性流动相极性1、基本原理：疏溶剂理论2、固定相：非极性烷基键合相3、流动相：极性大4、出柱顺序：极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱5、适用：非极性~中等极性组分（HPLC80%问题）正相键合相色谱键合固定相极性流动相极性1、基本原理：利用组分在两相中溶解度的差异2、固定相：极性大的氰基或氨基键合相3、流动相：极性小4、出柱顺序：先小，后大5、适用：用于分离各类极性化合物利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面3、键合相色谱

固定相采用凝胶凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称基本原理按分子大小分离。小分子可以进入凝胶颗粒的微孔中，出峰慢，而分子越大越被排斥，出峰越快流动相必须能溶解样品，并必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶4、凝胶色谱（分子排阻色谱法）

固定相作为固定相的离子交换剂，其基质大致有三大类：合成树脂、纤维素和硅胶基本原理利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的流动相离子交换色谱法所用流动相大都是一定pH和盐浓度（或离子强度）的缓冲溶液5、离子交换色谱

分离类型的选择HPLC的主要类型及选择根据相对分子质量选择相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱标准液相色谱类型最适合的相对分子质量范围是200～2000对于相对分子质量大于2000的样品，则用尺寸排阻法为最佳根据溶解度选择弄清样品在水、异辛烷、苯中的溶解度是很有用如果样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液一固吸附色谱例如，酸、碱化合物用离子交换色谱异构体用液一固吸附色谱根据分子结构选择用红外光谱法，简单地判断样品中的官能团。再确定采用什么方法

谢谢！