实验五--粗糙脉孢菌顺序四分子分析.ppt

课前问题什么是“处女蝇”？简述果蝇杂交试验中挑选处女蝇的必要性。简述粗糙脉孢菌的生活周史。在计算着丝粒距离的公式中，1/2的含义是什么？实验五粗糙脉孢菌顺序四分子分析一实验目的学习粗糙脉孢菌的培养方法和杂交技术。了解粗糙脉孢菌的生活史，通过对脉孢菌杂交产生的子囊孢子的统计分析，验证遗传学的基本规律，掌握着丝粒作图的方法。二实验原理脉孢菌的四分子分析涉及到其减数分裂过程中的重组、交换的整个过程，两种不同接合型（matingtype）的个体产生的短暂二倍体进行的减数分裂形成了四个单倍体的细胞。根据在同源染色体联会时有无非姊妹染色体的交换，带有基因标记的子囊孢子可以直接显现出来，因此是遗传分析工作中的有用工具。三实验方法及步骤3.1?制备培养基：①野生型菌株的培养基（土豆培养基）：②培养缺陷型菌株的培养基：③杂交用培养基：3.2菌株的培养：分别将野生型及缺陷型的菌株接种到相应的培养基上进行扩大培养，注意要严格在超净工作台上进行无菌操作，以防细菌和其它真菌的感染。3.3接种杂交:在无菌条件下取野生型和缺陷型的少许分生孢子或菌丝接种到同一试管的杂交培养基上。在杂交培养基中放入一张灭菌的滤纸，把两种菌株接在滤纸的两侧以便于杂交成功后收获子囊果。接种结束后，将试管放在28℃下恒温培养2周，当出现黑色的子囊果时，应及时进行镜检。野生型的子囊孢子成熟后为黑色，赖氨酸缺陷型的子囊孢子成熟较慢因而呈灰色或浅灰色。在此过程中一定要经常取材镜检，因为只有发育适中的子囊果便于解剖和观察。3.4结果分析:用解剖针从培养基中的滤纸上挑取颜色较深、个体较大的子囊果置于载玻片上，滴加一滴5％的次氯酸钠溶液，用解剖针的针尖轻压子囊果，使其破裂将子囊释放出来，盖上盖玻片，或用另一张干净的载玻片压在子囊果上，清压后子囊就可释放出来，在解剖镜下或低倍显微镜下进行观察统计。非交换型①AAAAaaaa②aaaaAAAA交换型③AAaaAAaa④aaAAaaAA⑤AAaaaaAA⑥aaAAAAaa今日实验安排：1.观察果蝇产卵情况，倒亲本。2.粗糙脉孢菌菌种培养。原养型及赖氨酸缺陷型每组各一只（二楼超净台操作）。3.清洗果蝇培养瓶，配制果蝇培养基.4.清洗试管，配制粗糙脉孢菌杂交培养基。