(20)--3.9 叶的培养植物组织培养.ppt

;目录;一、叶培养的意义;植物叶培养是指以离体的叶器官为外植体进行培养，再生植株的过程。离体叶培养包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。

;;4.利用离体叶组织的再生特性，建立植物体细胞快速无性繁殖系，提高某些不易繁殖植物的繁殖系数。

5.叶细胞培养物是良好的遗传诱变系统，经过自然变异或者人工诱变处理可筛选出突变体而应用于育种实践。

;二、叶组织培养的方法;大多数植物的叶原基、幼嫩叶片，双子叶植物的子叶等，都可以用于叶组织的脱分化和再分化培养。

用幼嫩叶片进行培养时，选取顶端未充分展开的幼嫩叶片。经流水冲洗后，用蘸有少量75％乙醇的纱布擦拭叶片表面，再用0.1％升汞溶液中消毒5～10min，最后用无菌水冲洗3～5次。消毒时间根据供试材料的情况而定，特别幼嫩的叶片时间宜短。消毒后的叶片转入到铺有无菌滤纸的培养皿内。注：幼嫩与成熟叶片消毒时间不同。;;叶组织培养常用的有MS、White、N6等培养基。培养基中的碳源一般都使用蔗糖，浓度为3％左右。培养基中附加椰子汁等有机添加物，有利于叶片组织培养中的形态发生。

;叶片组织接种后于25～28℃条件下培养，每天光照12～14h，光照度约为1500～2000lx。

不定芽分化和生长期应增加光照度到3000～5000lx。;三、影响叶培养的因素;1.基因型不同植物种类、同一物种的不同品种间在叶组织培养特性上有一定的差异。

2.植物生长调节剂细胞分裂素对芽的分化影响，6-BA的作用好于KT的作用。但6-BA对不定芽的进一步发育即茎叶的形成有抑制作用。

细胞分裂素与生长素的组合细胞分裂素与生长素配合使用，诱导芽分化效果好于单独使用细胞分裂素。;3.供试植株的发育时间和叶龄

研究表明，烟草成株期，叶组织脱分化和再分化需要的时间较长。而且叶片膨大体积较大，多在刀口处形成大量的愈伤组织和分生细胞团，芽苗大多发生在这些细胞分生团和结构致密的愈伤组织上。幼叶可以直接从不同部位成苗。

离体叶片本身的位置对分化也影响很大。同一株烟草不同叶位叶片对器官分化的影响不同，发育完全的叶片，叶组织器官分化能力较发育幼龄叶片组织再分化能力低得多。

个体发育早期的幼嫩叶片较成熟叶片分化能力高，发育完全的叶片组织器官分化能力较幼龄叶片组织再分化能力低得多。;

在离体叶片再生中，叶脉的作用也是明显的。不少植物的叶外值体，常从叶柄和叶脉的切口处（如杨树、中华猕猴桃等）形成愈伤组织和分化成苗。;

极性也是影响某些植物叶组织培养的一个重要因素。烟草一些品种离体叶片若将叶背面朝上放置时，就不生长、死亡或只形成愈伤组织而没有器官的分化。

对离体叶片进行的损伤操作对于愈伤组织的形成具有一定的影响。大量的叶片组织培养证明，大多数植物愈伤组织首先在切口处形成，或切口处直接产生芽苗的分化。;四、离体叶组织形态

发生途径;叶原基;1.直接产生不定芽如羊齿植物（即蕨类植物）多见

2.由愈伤组织产生不定芽

3.形成胚状体

4.形成小鳞茎或原球茎;叶片诱导愈伤组织;叶片愈伤组织诱导形成;;叶片离体培养过程;A

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