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;目录;一、植物材料(培养物)的选取;二、植物材料(培养物)的预处理;三、植物材料(培养物)的冷冻处理;(1)快速冰冻法
将材料从0℃或预处理温度直接投入液氮,其降温速度在1000℃/min以上。这个过程可以使细胞内的水分子还未来得及形成结晶中心就降到了-196℃的安全温度,从而避免了细胞内结冰的危险。此法适用于那些高度脱水的材料,如种子等。;(2)慢速冰冻法
将处于0℃或其他预处理温度的材料以1-2℃/min的降温速度从起始温度降到-100℃,稳定1h后,投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至-196℃的方法。逐步降温过程可以使细胞内水分有充足的时间不断流到细胞外结冰,从而使细胞内水分含量减少到最低限度,达到良好的脱水效果,避免细胞内结冰。
这种方法适合于液泡化程度较高的植物材料,如悬浮细胞、原生质体等。
;(3)预冷冻法分步冰冻法
此法将??速和慢速2种冰冻方法结合起来。首先用较慢的速度(0.5~4℃/min)使植物材料从0℃降至一定的预冷温度(一般为-40℃)并停留一段时间(一般10min左右),使细胞进行适当的保护性脱水,然后再浸入液氮冷冻。
逐级冰冻法
植物材料经过冷冻保护剂0℃预处理后,逐级通过-10,-15,-25,-35,-40℃等,每个温度停留10min左右,然后浸入液氮。
;(4)干燥冰冻法
将样品在含高浓度渗透性化合物(如甘油、糖类物质等)培养基上培养一段时间,或者经硅胶、无菌空气干燥脱水数小时,或者用褐藻酸钙液泡包裹样品,无菌风进一步干燥,然后直接投入液氮;
或者用冷冻保护剂处理后吸除表面水分,密封于金箔中进行慢冻。
只要脱水足够,细胞内溶液浓度即可达到较高水平因而易进入玻璃化状态。这种方法对某些植物的愈伤组织、体细胞胚、胚轴、胚、花粉、茎尖及试管苗等较合适,但对大多数对脱水敏感的材料不适用。
;四、植物材料(培养物)的冷冻贮藏;五、植物材料(培养物)的解冻处理;a、快速解冻法
是指将液氮中保存的材料直接投入到37-40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500-750℃/min,大多数植物材料可采用此种方法。;化冻后的材料需立即进行洗涤,以除去材料组织中高浓度的冷冻保护剂,避免影响材料恢复和继续生长。最常用的洗涤方法是用含浓度为1.2mol/L蔗糖的基本培养基25℃下处理10min,也有用浓度为1.5~2.0mol/L的山梨醇的培养液进行保护剂成分的洗涤。;六、植物材料(培养物)的再培养;超
低
温
保
存
的
程
序;超低温保存后细胞或组织活力检测
冻后存活率的快速鉴定通常采用FAD荧光双醋酸法、TTC(氯化三苯四氮唑)还原法、Evans(伊凡蓝)法等。;生长抑制剂保存
1)高渗保存法
利用培养基的高渗透压,减少离体培养物吸收养分和水分的量,减缓生理代谢过程,从而减缓生长速度,达到抑制离体培养材料生长的种质保存方法。
高渗物质:甘露醇、蔗糖、PEG等
高渗保存配合低温效果更明显
如:6~10℃低温下,培养基中加4%甘露醇,可保存马铃薯1~2年,存活率最高可达90%以上。
;六、植物材料(培养物)的再培养;3)抑制生长的其他保存法
低压保存法:降低培养材料周围气压,达到抑制生长的目的,分为低气压与低氧压两种,保存原理相似。
饥饿法:从培养基中减去1~2种营养元素,使植株缺乏相关营养而处于最小生长量
干燥保存法:减少培养材料的含水量
矿物油覆盖法:使培养材料与空气隔绝,延缓生长
低光照培养:适当减弱光照强度,缩短光照时间,进而减缓试管苗生长
;;目录;1、瓜类植物种子的分类;;1、瓜类植物种子的分类;1、瓜类植物种子的分类;2、常规品种原种种子生产程序;2、常规品种原种种子生产程序;2、常规品种原种种子生产程序;3、常规品种良种种子生产程序;3、常规品种良种种子生产程序;;3、常规品种良种种子生产程序;3、常规品种良种种子生产程序;
根据原品种的特征、特性,兼顾生长健壮、成熟一致、籽粒饱满、无病虫害等方面,在选纯的基础上选优。
自交作物以形态特征充分表现的成熟期为主,异交与常异交作物则必须在开花散粉前及时除去杂、劣株,避免造成生物学混杂。
随着繁殖世代的增加,混杂退化在所难免。种子田中的种子经若十代(一般是3代)以后,应该用其原种进行更新,以确保品种的增产潜力,延长品种的利用年限。
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根据原品种的特征、特性,兼顾生长健壮、成熟一致、籽粒饱满、无病虫害等方面,在选纯的基础上选优。
自交作物以形态特征充分表现的成熟期为主,异交与常异交作物则必须在开花散粉前及时除去杂、劣株,避免造成生物学混杂。
随着繁殖世代的增加,混杂退化在所难免。种子田中的种子经若十
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