(2.1)--[2]chapter2酶工程酶工程酶工程.pptVIP

“勤俭节约”的大肠杆菌已知分解利用乳糖的酶有：β-半乳糖苷酶；β-半乳糖苷透过酶；硫代半乳糖苷转乙酰酶。实验：1.大肠杆菌生长在葡萄糖培养基上时，细胞内无上述三种酶合成；2.大肠杆菌生长在唯一碳源乳糖培养基上时，细胞内有上述三种酶合成；当换成葡萄糖培养基时，三种酶基本消失；3.表明菌体生物合成的经济原则：需要时才合成。这种现象就是酶合成的诱导概念（P32）：加入某些物质（诱导物）使酶的生物合成开始或加速进行的现象。诱导物一般是酶催化作用的底物或其底物类似物。例：乳糖诱导?-半乳糖苷酶的合成淀粉诱导a-淀粉酶的合成1.2.1酶合成诱导实验：1.大肠杆菌生长在无机盐和葡萄糖的培养基上时，检测到细胞内有色氨酸合成酶的存在；2.在上述培养基中加入色氨酸，检测发现细胞内色氨酸合成酶的活性降低，直至消失。3.表明色氨酸的存在阻止了色氨酸合成酶的合成，体现了菌生长的经济原则：不需要就不合成。这种现象就是酶合成的产物阻遏“勤俭节约”的大肠杆菌1.2.2—反馈阻遏作用产物阻遏，是指酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的现象。阻遏物一般是酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物。(P33)无产物时1.2.2—反馈阻遏作用产物阻遏，是指酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的现象。阻遏物一般是酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物。有产物时1.2.2——分解代谢物阻遏作用调节蛋白CAP(环腺苷酸受体蛋白或降解活化蛋白的缩写)可与cAMP结合，形成CAP-cAMP复合物，该复合物可以结合到启动子P区域，使DNA双链打开，利于RNA聚合酶与DNA的结合，启动或加快转录。实质——cAMP通过启动基因调控酶的合成CAPcAMP1.2.2——分解代谢物阻遏作用CAPcAMPX解决这种阻遏的方式就是添加cAMP，控制易用碳源的用量。1.2.2——分解代谢物阻遏作用概念：某些物质（容易利用的碳源）经过分解代谢产生的物质阻遏某些诱导酶生物合成的现象。(P31)下列有关降解物基因活化蛋白(CAP)的哪个论点是正确的()A．CAP-cAMP可专一性地与启动基因结合，促进结构基因的转录B．CAP可单独与启动子(基因)相互作用，促进转录C．CAP-cAMP可与调节基因结合，控制阻遏蛋白合成D．CAP-cAMP可与RNA聚合酶竞争性地结合于启动基因，从而阻碍结构基因的转录抢答1.3、酶生物合成的模式微生物细胞生长曲线迟缓期（调整期）生长期（对数生长期）稳定期（平衡期）衰亡期知识回顾——微生物生长曲线缩短迟缓期，利用对数期，收获稳定期，延缓衰亡期。1.迟缓期：分裂迟缓，对外界不良条件反应敏感；2.对数期：细胞数目以几何级数增加，细胞代谢旺盛，酶系活跃；3.稳定期：新增加活细胞＝衰老死亡细胞数，生长处动态平衡；细胞数达最大，细胞开始储存糖原等；4.衰亡期：个体死亡数大大超过新生数，活菌数急剧下降，菌体细胞呈多形态酶的生物合成模式（四类） ——根据酶产生与细胞生长的关系同步合成型延续合成型中期合成型滞后合成型1.3、酶生物合成的模式酶的生物合成与细胞生长同步进行，又称生长偶联型。组成型的酶多为此类型。特点：（1）发酵开始，细胞生长，酶也开始合成，说明：（2）生长至平衡期后，酶浓度不再增长，说明：1.3.1同步合成型不受分解代谢物和终产物阻遏。mRNA很不稳定。酶的合成伴随着细胞生长而开始，但在细胞进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的一段时间。属于该类型的可以是组成型的酶，也可以是诱导型的酶。特点：（1）该类酶不受分解代谢产物阻遏和终产物阻遏。13.2延续合成型（2）该酶对应的mRNA是相当稳定的。1.3.3中期合成型酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而进入细胞平衡期后，酶的合成也终止。（2）该酶对应的mRNA不稳定。特点：（1）该类酶的合成受分解代谢物或产物的阻遏。1.3.4滞后合成型只有当细胞生长进入平衡期后，酶才开始合成。又称非生长偶联型。许多水解酶的合成都属于这一类型。特点：（1）该类酶受分解代谢物阻遏作用的影响，阻遏解除后，酶才大量合成。（2）该酶对应的mRNA稳定性高。时间(h)A.同步合成型;B.延续合成型;C.中期合成型;D.滞后合成型浓度细胞浓度酶浓度酶浓度酶浓度细胞浓度细胞浓度ACD细胞浓度酶浓度B