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β--内酰胺酶

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β-内酰胺酶及其检测方法

β-内酰胺酶是细菌产生的可水解β-内酰胺环抗生素的酶。β-内酰

胺酶（β-lactamase）的产生是细菌对(β内酰胺类)抗菌药物耐药最常

见的机制，，广泛地涉及到许多社区获得性感染和医院内感染的重要

病原菌，在各种耐药机制中占80%。β-内酰胺酶是由多种酶组成的酶

家族，通过水解或非水解方式破坏进入菌体内的β-内酰胺环，导致β-

内酰胺类抗生素失活，这些酶的基因存在于细菌的染色体或质粒中。

它的种类和数量现已超过了400种，β-内酰胺酶分类比较多而复杂，

最常用的有两种，即分子生物学方法和布氏法。

其检测方法包括常规方法和分子生物学方法。前者包括微生物法，

碘量法，纸片酸度定量法，.产色头胞菌素法；后者包括转移性分析，

基因分析，

酶蛋白性质分析。

一β内酰胺酶的合成、定位及传播方式

β内酰胺酶既可以在细菌内组成型表达，如铜绿假单胞菌；又可以

由质粒介导的诱导表达，如嗜水气单胞菌及金黄色葡萄球菌。而质粒

介导的方式是细菌耐药性传播的一个主要机制，在革兰氏阴性菌中利

用接合的方式进行传播，而在革兰氏阳性菌中利用转导的方式获得耐

药性状。细菌的这种耐药性状的可转移性正是细菌耐药性爆发的原因。

在革兰氏阴性菌中，β内酰胺酶象胞外酶一样被分泌到膜外的环境，而

在革兰氏阳性菌中，β内酰胺酶在它与受体结合以攻击抗生素的之前则

停留在周质腔中。

二β内酰胺酶的作用机制

β内酰胺酶破坏β内酰胺抗生素的β内酰胺环有两种作用机制。

第一，绝大多数常见的β内酰胺酶有一个依赖丝氨酸发挥作用的

机制，并且根据氨基酸序列组成分为三类（A，C和D）。通常它们的

活性位点具有一个狭窄的纵形沟状结构，在沟的底部形成了一个空腔

（氧阴离子袋），这种疏松的构造容易弯曲，便于结合底物。由于β

内酰胺环上的羰基碳在结合β内酰胺酶活性部位的丝氨酸时发生了不

可逆的反应，结果使其成为开环物，进而重建了β内酰胺酶。这类酶

对青霉素、头孢菌素、单内酰环类抗生素都有活性。

第二，是一类不大多见的β内酰胺酶，被称为金属类β内酰胺酶，

或B类β内酰胺酶。它们的特点是利用一个2价金属离子，绝大多数

为锌离子，分别与组氨酸或半胱氨酸结合，或同时与二者结合，并与β

内酰胺类抗生素的羰基碳的酰胺键相互作用，使其不能发挥作用。这

类酶主要对青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类抗生素发挥作用，但对单

内酰环类抗生素无效。

三β内酰胺酶的分类

迄今为止，人们发现的β内酰胺酶的性质多种多样，从20世纪60

年代后期以来人们做了许多尝试将其分类。这些分类方法主要有两个

原则：第一种也是最古老的方法是基于酶的生化及功能特性；第二种

方法是基于酶的分子结构。

1.β内酰胺酶的功能学分类

现有几种标准来用于β内酰胺酶的分类，包括抗生素的抑菌的作

用范围，β内酰胺酶的耐药范围，β内酰胺酶的等电点、最大水解速度、

结合常数、等电聚焦、蛋白分子量等方法。

最新的分类方法是Bush于1995年提出，他将β内酰胺酶分为四

个大类（1－4）及六个亚类（a－f）。

第1类为耐头孢菌素的β内酰胺酶，但不被克拉维酸所抑制，分

子生物学分类属于C类。

第2类为耐青霉素酶、耐头孢菌素酶，可以被克拉维酸所抑制，

分子生物学分类属于A和D类，是由最初的TEM和SHV基因表达的

结果。但由于表达的β内酰胺酶的TEM和SHV基因数量越来越多，

它们首先被分为两个亚类2a和2b。2a亚类只包括耐青霉素酶，而2b

亚类范围较广，它可以使青霉素、头孢菌素以同样速度失活。进一步

的分类都是在2b基础上划分的：亚类2be，字母e代表广谱酶活性，

即ESBLs，可以使第三代头孢菌素（头孢他啶、头孢噻肟、头孢泊肟）

失活，还可以使单内酰环类抗生素（氨曲南）失活；亚类2br，字母r

表示减少与克拉维酸及舒巴坦的结合，所以也被称为TEM基因表达的

有抗性的抑制剂，可是它们依然对他佐巴坦敏感。随后又分出4个亚

类，亚类2c是对羧苄青霉素效果比对青霉素要好，而且对氯唑西林有

一定的作用。亚类2d