原创力文档- 1、本文档共7页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
单抗制备流程
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小
鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增殖,从而创立了单
克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新
纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤
细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步
骤，下面按照制备单克隆抗体的流程顺序,逐一介绍其实验方法。
一、细胞融合前准备
(一)免疫方案
选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重
要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗
原的特性不同而定。
1.颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果.下面以细胞
性抗原为例的免疫方案:
初次免疫1×10７／0。5mlip(腹腔内注射)
↓2~3周后
第二次免疫1×10７／0。5mlip
↓3周后
加强免疫(融合前三天)1×10７／0.5mlip或iv（静脉内注射)
↓
取脾融合
2。可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂，常用佐剂:福氏完全佐剂，福氏
不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状，放一
滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态.商品化福氏完全佐
剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫Ag1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射
│（一般0.8～1ml0.2ml／点)
↓3周后
第二次免疫剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip
│（ip剂量不宜超过0。5ml)
↓3周后
第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip
│(5～7天后采血测其效价，检测免疫效果)
↓2~3周后
加强免疫，剂量50～500μg为宜,ip或iv
↓3天后
取脾融合
目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如
①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降
低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使
用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，促进免疫细胞对抗原反应性。
(二)饲养细胞
在制备单克隆抗体过程中，许多环节需要加饲养细胞,如：在杂交瘤细胞筛
选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有:
小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用）、小鼠脾脏细胞或小鼠胸腺细胞，也有人用小鼠成
纤维细胞系3T3经放射线照射后作为饲养细胞，使用比较方便，照射后可放入液
氮罐长期保存，随用随复苏。
小鼠腹腔巨噬细胞的制备
小鼠采用与免疫小鼠相同的品系，常用BaLb／c小鼠6～10周龄
↓
拉颈处死浸泡于75%酒精，消毒3～5分钟
↓
用无菌剪刀剪开皮肤,暴露腹膜
↓
用无菌注射器注入6～8ml培养液
↓
文档评论（0）