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种子生产与经营专业教学资源库;主要内容;一、实验目的
本实验旨在了解和掌握植物总RNA的分离和纯化方法。;二、实验原理
在液氮中研磨植物材料,使部分细胞破碎,进一步使植物细胞在裂解液中裂解,用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经氯化锂沉淀总RNA,洗涤后得到高质量的RNA。;三、实验材料;（三）实验仪器
研钵、离心机、冰浴盒;四、实验步骤
（1）取5～10g材料放入研钵中,加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中,保证材料始终浸在液氮中,研磨约30min)。
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（2）待液氮自然挥发干净后,将材料转入100ml的离心管中,加入6～8倍体积的裂解液1,轻轻搅拌后,0℃冰浴20min。12000r/min,4℃离心15min。
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;四、实验步骤
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（3）取上清,加入1/3体积的3mol/L醋酸钠,1/5的氯仿异戊醇,轻轻摇匀,0℃冰浴20min。
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（4）2000r/min,4℃离心15?min(加5倍体积裂解液2溶解沉淀以提取DNA)。
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（5）取上清,加入等体积冰浴冷却的异丙醇,混匀且冰浴10min。
?;四、实验步骤
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（6）5000r/min,4℃离心10min,将沉淀溶于5ml含有0.1%SDS的TE缓冲液中,加入8mol/LLiCl使终浓度至2.5mol/L,冰浴3h或4℃过夜。
?（7）12000r/min,4℃离心10min。
?（8)70%乙醇洗涤沉淀两次,空气干燥10min,溶于无菌水(DEPC焦碳酸二乙酯,处理),加入1/10体积10%的SDS,重复第4～6步骤,进一步除去蛋白质,70%乙醇20℃长期保存。
;五、实验注意事项
(1)操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。?
(2)实验所涉及的离心管，Tip?头，移液器，实验台面等要彻底处理。
(3)实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保?RNase-Free。;谢谢观看
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