动物遗传学实验.ppt

《动物遗传学》实验山东农业大学动科学院主讲：姜运良实验一果蝇唾液腺细胞的染色体一实验目的练习果蝇唾液腺的分离方法掌握唾液腺染色体的制片技术观察唾液腺染色体的特点二遗传物质发现的历史19世纪60年代——孟德尔定律（遗传单位）19世纪80年代——染色体1903年——同源染色体1909－1911年——交换or遗传重组1911年——染色体图谱1944－1952年——DNA（遗传物质）1953年——DNA双螺旋三实验原理1933年，美国德州大学的Thoephiluspainter在某些昆虫细胞中发现了巨大染色体双翅目昆虫（果蝇）幼虫期的唾液腺细胞很大，其中的染色体称唾液腺染色体，比一般的普通染色体的100－150倍，又称巨大染色体。在幼虫发育过程中，这些细胞停止有丝分裂，但唾液腺染色体仍然进行复制，产生多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不一、宽窄不同的带，这些带的数目和位置是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征。如果染色体缺失、重复、到位、易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。四、实验材料和用品实验材料黑腹果蝇的三龄幼虫实验用品显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸。E－生理盐水、1％醋酸洋红。五、实验步骤载玻片置于显微镜下，上面滴加一滴生理盐水，放上果蝇幼虫，两手各拿一枚解剖针，左手解剖针按住幼虫的后端1/3,右手解剖针按住头部用力后拉，把头部从身体拉出，唾液腺随之而出。（一对双叉形透明的囊状腺体）。除去幼虫其他组织部分，把唾液腺周围的脂肪剥离干净，然后将唾液腺移到干净的滴有醋酸洋红的载玻片上。染色10分钟，盖上盖玻片，用滤纸轻压一下吸去多余的染色液后放在桌子上，用大拇指用力，并横向揉几次（勿使盖玻片移动）。显微镜观察，先在低倍镜下观察，找到分散好的染色体图像，再高倍镜观察，画图。五、实验步骤载玻片滴生理盐水→放幼虫→用解剖针将头部和身体拉开→找到唾液腺并将其剥离干净→转移到有一滴醋酸洋红的载玻片上→10min→盖盖玻片→压片→观察六：作业

实验报告分组值日显微镜放回原位

实验二PCR扩增和琼脂糖电泳检测一、实验目的学习和掌握PCR扩增及琼脂糖电泳的基本原理和方法。二、实验原理多聚酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR）的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧设计寡核苷酸引物，经变性（94℃）、退火（45~68℃）和延伸（72℃）若干个循环后，DNA扩增2n倍。所使用的酶为耐热的DNA聚合酶（Taq酶）。琼脂糖是D-和L-半乳糖残基通过α（1→3）和β（1→4）糖苷键交替构成的线状聚合物根据浓度的不同，琼脂糖凝胶可以构成一个直径从50nm到略大于200nm的三维筛孔的通道。将DNA加到凝胶的负极，在电场的作用下，将不同大小的片段分开三、仪器、材料与试剂仪器PCR热循环仪琼脂糖凝胶电泳及检测系统材料与试剂鸡基因组DNAdNTPs（10mmol/L）上下游引物（浓度10μmol/L）rTaq酶（5U/μL）DL2000DNAMarkerMgCl2（25mM）10×PCR缓冲液灭菌双蒸水1.5%琼脂糖（含EB，注意致癌）电泳缓冲液，上样缓冲液。四、实验步骤PCR扩增反应体积（20μl），在0.2mlEppendorf中依次加样：10×PCRbuffer2.0μlMgCl21.6μldNTPs1.6μl上游引物0.5μl（10μmol/L）下游引物0.5μl（10μmol/L）DNA1.0μlddH2O12.6μlrTaq0.2μlPCR扩增反应条件：94℃3min，94℃30s，58℃30s，72℃40s（循环28次），72℃10min在PCR扩增仪上进行扩增。四、实验步骤琼脂糖凝胶电泳配制1.5%琼脂糖凝胶，取5μlPCR扩增产物+1μl