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WATERS液相色谱教程三四七

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启动液相色谱仪器的流程

§开启HPLC系统各个设备的电源

–打开泵、自动进样器、检测器电源，待设

备通过自检后，打开计算机，启动色谱管

理软件

§准备流动相

–过滤,脱气

§色谱泵排气

–用新配制的流动相灌注泵

启动液相色谱仪器的流程

§用准备好的流动相平衡色谱系统

–可在泵的控制面板上设定流速参数(15×5泵需在软件

控制下操作)

–系统大约需平衡0.5--1小时方能稳定工作

§准备样品

–用流动相溶样或重组样品

§编制仪器方法,开始实验

液相色谱对流动相的要求

§色谱柱对流动相的要求

–过滤除去微粒

–纯度的要求

§超纯水，或用KMnO处理过的双蒸水

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§有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低)，

并与填料相匹配

–缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内

–缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM)

–流动相对样品的溶解度

§调整有机溶剂和水的比例

§最好用流动相溶样

液相色谱对流动相的要求

§液相色谱仪器对流动相的要求∶

–与检测器匹配

–脱气

–避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统）

–溶剂的粘度

–防止细菌的生长

流动相的脱气

§流动相脱气的目的

–使色谱泵的输液准确

§输液量均匀准确，并且脉动减小

§保留时间及色谱峰面积的重现性提高

–提高检测的性能

§防止气泡引起的尖峰

§基线稳定，信噪比增加

§溶剂的紫外吸收本底降低

–保护色谱柱

§减少死体积

§防止填料的氧化

流动相脱气的方法

§加热

–简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容

造成流动相组成的变化

§抽真空

–同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果

§超声波振荡

–简单，但效果不够理想；超声时间不要太长(1分钟

左右即可)

§通惰性气体（一般用氦气）

–可保持在线连续脱气，多用于低压梯度

§在线脱气机（in-linedegasser)

–可保持连续脱气，多用于低压梯度

流动相的保存

§有机溶剂流动相:

–室温下密封,避光保存

§缓冲盐流动相:

–当日现配现用

–低温下密封保存,一般不超过3天

–防止微生物生长

§有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相:

–低温密封保存

–防止有机相的挥发

§选用适宜的容器

保存于聚乙烯瓶中的超纯水

测试条件

水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min

色谱柱:C18反相柱(Waters)

梯度:线性100%水－100%乙腈

波长:254nm