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p53K120位点乙酰化修饰辅助因子的鉴定和生物学功能研究中期报告

本研究针对p53蛋白关键位点K120乙酰化修饰的辅助因子进行了鉴定和生物学功能研究，现将中期研究进展报告如下：

一、实验方法

1.体外乙酰化实验：构建p53K120位点乙酰化修饰辅助因子表达质粒，转染至293T细胞，收获细胞后进行免疫共沉淀实验以鉴定共沉淀蛋白；

2.CHIP实验：采用CHIP-PCR技术对目标基因启动子区域进行沉淀，利用实时荧光定量PCR技术检测CHIP-PCR产物的含量水平，分析与p53K120位点乙酰化修饰辅助因子的关系；

3.细胞生物学实验：利用靶向基因敲除技术制备敲除p53K120位点乙酰化修饰辅助因子的稳定细胞株，进行细胞增殖和凋亡实验，分析其对p53的影响。

二、实验结果

1.体外乙酰化实验：成功构建了p53K120位点乙酰化修饰辅助因子表达质粒，并经转染后获得相应的共沉淀蛋白，其中包括已知的与p53功能有关的多种乙酰化修饰酶，如p300和CBP等。

2.CHIP实验：成功对目标基因启动子区域进行沉淀，在PCR检测后发现，p53K120位点乙酰化修饰辅助因子可以促进目标基因的表达，进一步验证了其与p53K120位点的乙酰化修饰修饰关系。

3.细胞生物学实验：成功制备了敲除p53K120位点乙酰化修饰辅助因子的稳定细胞株，初步实验结果表明，该辅助因子的敲除会显著降低细胞的增殖率，并增加细胞凋亡率，说明该因子对p53功能的调节至关重要。

三、研究展望

1.探究p53K120位点乙酰化修饰辅助因子介导p53通路的分子机制，进一步验证其在p53相关疾病中的作用；

2.通过系统生物学方法研究该辅助因子的作用网络，发掘潜在的致病机制和治疗靶点；

3.利用CRISPR-Cas9等新技术建立体内的疾病模型，深入研究p53K120位点乙酰化修饰辅助因子与疾病的关系。