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**微生物学实验实验四细菌的芽孢染色实验目的了解细菌的芽孢染色原理。2.掌握细菌的芽孢染色方法。实验原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区分。芽孢壁厚，透性低、着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料如孔雀石绿在加热条件下进行染色时，弱碱性染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢。进入菌体的染料通过水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。用复染液（番红）染色，菌体和芽孢因呈现不同的颜色而易于区别。实验器材（一）显微镜，香柏油，二甲苯，载玻片，镊子，酒精灯，滴管，烧杯，接种环，5%孔雀石绿染色液，番红染色液，吸水纸。（二）苏云金芽孢杆菌枯草芽孢杆菌实验步骤取干净载玻片，加一滴单蒸水，然后用接种环挑取适量苏云金芽孢杆菌涂片。2.将玻片反复在酒精灯上方通过几次（用手指触摸涂片反面，以不汤手为宜），对标本进行干燥、固定。3.在涂片上加2～3滴孔雀石绿染色液，然后在酒精灯上缓缓加热（注意不能使染色液沸腾），必要时可再滴加少许染色液。加热时间从冒蒸汽时开始计算2～3分钟。4.倾掉染色液。等待玻片冷却后，用水冲洗至无染色液为止。５.用番红复染１～２分钟，水洗至无染色液，用吸水纸除去残留水分。６.用油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。蜡状芽孢杆菌芽孢染色注意事项１.供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜。２.染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。实验思考１.用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？为什么？２.芽孢染色为什么要加热?为什么芽孢和菌体能染成不同的颜色?*
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