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microRNA-141及HMGB1shRNA构建及干扰效果的验证的开题报告

题目：microRNA-141及HMGB1shRNA构建及干扰效果的验证

研究背景：

microRNA-141是一种非编码小RNA，其调控的靶基因和生物学功能在多种疾病中发挥重要作用。同时，高迁移率族蛋白结合蛋白1(HMGB1)是一种广泛存在于体内的分子。在许多肿瘤中都发现了HMGB1高表达。HMGB1在炎症和肿瘤的进展中发挥作用，所以其作为治疗靶点的研究越来越受关注。本研究将构建microRNA-141和HMGB1shRNA，验证其在体外及体内对目标基因的干扰效果。

研究内容：

1.构建microRNA-141和HMGB1shRNA表达载体，并进行鉴定；

2.将表达载体转染入细胞，利用Westernblot和qPCR等实验技术检测microRNA-141和HMGB1shRNA对目标基因表达的干扰效果；

3.逐步筛选出具有资格的转染效果的细胞株，并进行相应的功能实验验证；

研究意义：

构建和验证microRNA-141及HMGB1shRNA的干扰效果，将有助于理解它们参与的疾病及其发病机制，并为靶向疾病治疗提供新的思路和手段。

研究方法：

1.通过PCR扩增microRNA-141、HMGB1shRNA和载体相关的DNA片段；

2.将DNA片段克隆入表达载体中并测序确认；

3.将表达载体转染入细胞，利用Westernblot和qPCR等实验技术检测microRNA-141和HMGB1shRNA对目标基因表达的干扰效果；

4.通过MTT、Transwell、流式细胞术等技术实验探究干扰效果的功能意义。

研究预期结果:

1.成功构建microRNA-141和HMGB1shRNA表达载体；

2.实现对目标基因的干扰效果；

3.获得具有资格的细胞株，为后续的研究提供支持。

研究难点：

1.构建表达载体的选择；

2.表达载体的克隆和测序；

3.干扰效果的验证和筛选细胞的挑选。

研究限制：

本研究主要集中在细胞水平的实验，还需在体内进行验证，后续还需深入探究。

总结：

本研究将构建microRNA-141和HMGB1shRNA并验证干扰效果，为相关疾病靶向治疗提供一定的实验基础和理论支撑。