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Atoh7调控视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化的机制研究的开题报告

一、背景和研究意义

视网膜是眼睛的内层组织，是视觉过程的起点，其中包含神经节细胞、视锥细胞、视杆细胞、Müller细胞等多个细胞类型。神经节细胞是视网膜内接收光信号并传递视觉信息到大脑的细胞，其细胞数量和分布密度对视觉质量具有重要影响。因此，研究视网膜神经节细胞的发育和分化机制，对于深入理解视觉发育和疾病治疗具有重要意义。

Atoh7是一种重要的转录因子，其在视网膜神经节细胞的定向分化中发挥着关键作用。研究发现，Atoh7缺失会导致早期视网膜神经节细胞发育障碍甚至缺失，从而影响视觉功能。而Müller细胞，是视网膜中最常见的细胞类型之一，具有支持、维持神经元和血管稳态等重要作用。但近期研究发现，Müller细胞亦具有分化能力，并可以定向分化为神经节细胞，进而参与到视网膜神经元的发育中。因此，深入研究Atoh7在视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化中的作用机制，对于深入理解视网膜神经元的发育和视觉功能具有重要意义。

二、研究内容

1.建立Müller细胞本体细胞系

通过Müller细胞本体细胞系的建立，为后续研究提供基础支持。

2.Atoh7基因编辑与过表达

通过siRNA靶向Atoh7基因，或是利用CRISPR-Cas9基因组编辑技术，在Müller细胞中实现Atoh7的基因打靶或过表达，进一步探究Atoh7在视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化中的作用机制。

3.转录组测序分析

通过RNA-seq，比较不同条件下Müller细胞的差异性表达基因，进一步探究Atoh7在视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化中的作用机制。

4.细胞命令转移实验

构建细胞命令转移实验模型，通过将Atoh7过表达Müller细胞和未过表达的Müller细胞进行共培养，研究Atoh7表达Müller细胞对其他细胞状态的影响，以进一步探究Atoh7在视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化中的作用。

三、研究方法

实验方法主要包括：1）细胞培养方法，包括Müller细胞本体细胞系等的建立；2）基因打靶和过表达，包括siRNA技术和CRISPR-Cas9技术等；3）RNA-seq数据分析和细胞命令转移实验等。

四、研究预期结果

本研究旨在探究Atoh7在视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化中的作用机制，并得出如下预期结果：1）Müller细胞中Atoh7对神经节细胞定向分化具有促进作用；2）Atoh7作用下，Müller细胞中部分差异性表达基因的转录调控发生改变；3）Müller细胞命令转移实验模型中，Atoh7过表达Müller细胞可对其他细胞状态产生一定影响，可能存在一定程度的细胞信号转导作用。

五、研究意义

1）深入探究视网膜神经元发育机制；

2）揭示Müller细胞参与视网膜神经元发育和定向分化的机制；

3）为视网膜神经元疾病治疗提供新思路和新靶点；

4）对阐述细胞向神经元分化的机制具有重要启示作用。