从土壤中分离微生物.pptVIP

一.实验目的1.了解微生物分离和纯化的原理；2.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接种培养的基本操作技术，进一步巩固微生物的无菌操作技术。二、实验原理微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进行适当的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。挑取某个单菌落转接到斜面试管即得纯培养的微生物菌种。将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种的关键是要严格地进行无菌操作。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化得到许多有价值的菌株。三、主要器材牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基、马丁培养基、移液管、三角瓶、无菌水、接种环、酒精灯、土壤悬液、无菌培养皿、玻璃刮铲、恒温培养箱等。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此，可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。3.涂布分离将适当浓度的0.1ml菌悬液小心地滴在平板培养基表面位置。右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分布均匀然后改变方向沿另一垂直线来回推动，再沿平板内边圆周方向涂布几次。稀释涂布分离法示意图4.划线分离最常用的平板接种法是划线法。先将接种环用火焰灼烧灭菌，待冷却后挑取检查材料，涂于平板的上端，随即向下连续平行划线至平板的底部，划线时接种环与平板表面所成的角度要小，以免划破琼脂。划线要密而不重复，充分利用平板的表面。划线完毕，先盖好平板，再将接种环上残留的细菌用火焰灭菌。平板划线分离法示意图5.稀释混合倒平板肉汤培养基融化备用；用1ml无菌吸管加菌悬液于无菌平皿中；以无菌操作将冷却至45℃左右的培养基倒入上述平板内，旋转混合均匀。6.恒温培养箱培养马丁、高氏培养基平板于28℃倒置培养5天，肉汤培养基平板于37℃倒置培养28小时后观察结果。六．注意事项1.用于划线的接种环环口必须圆、平，划线时环口与平板的夹角应小，动作要轻，防止划破平板；2.用于平板划线的培养基琼脂含量宜高些，倒得厚点，倒之前温度不要过高（45℃左右），以免冷凝水过多。*实验七从土壤中分离微生物四、操作步骤(一)分离纯化常用的方法1.简易单细胞挑取法；2.平板分离法选择适合待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。平板划线分离法培养结果五、实验报告（一）实验结果三种培养基平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述其菌落特征。（二）思考题1.如何确定平板上某个菌落是否为纯培养？请写出试验的主要步骤。2.如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产生高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方案。