植物原生质体的分离与融合.pptVIP

植物原生质体的分离与融合;实验的意义;实验原理

;原生质体融合;聚乙二醇高聚分子的诱导融合技术，在1974年创立，这种方法使原生质体融合率大幅度提高，特别是与高Ca2+和高pH结合使用，可使融合率提高40%～50%，说明PEG是一种高效诱导融合剂。此外，它的最大优点是无特异性，甚至动植物界间的界限也可以打破。如使用得当，对原生质体也无伤害作用。;实验材料仪器及试剂;实验操作;2.原生质体的分离;获得原生质体;实验操作;实验结果;黄番茄和红番茄原生质体融合结果;菠菜和黄番茄原生质体融合结果;我们发现实验所期望的异源二倍融合细胞所占的比例并不大，而相应较多地是未融合的单个细胞和细胞碎片，由此可见原生质体融合的效率并不是很高。;实验分析;1分子量与浓度:细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG的分子量越大、浓度越高,对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40-60%。

2PEG的pH值:经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。

3PEG的处理时间:处理时间越长，融合效果越好,但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。

4融合时的温度:由生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。因此，为了获得更好的融合效果,在细胞