化学品 用虹鳟肝S9亚细胞组分测定体外固有清除率试验 编制说明.docxVIP

1

《化学品用虹鳟肝S9亚细胞组分测定体外固有清除

率试验》编制说明

（征求意见稿）

一、工作简况

（一）任务来源

根据2022年12月23日《国家标准化管理委员会关于下达化工园区和危险化学品管理推荐性国家标准计划及相关标准外文版计划的通知》，国家标准计划《化学品用虹鳟肝S9亚细胞组分测定体外固有清除率试验》（计划号T-469）。由全国危险化学品管理标准化技术委员会提出并归口，由广

东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）组织制定。

（二）协作单位

协作单位包括生态环境部固体废物与化学品管理技术中心、中国检验检疫科

学研究院等。

（三）制定背景

随着工业化进程的持续推进，新污染物（emergingcontaminants）不断被产生并释放到生态环境中，为避免具有持久性有机污染物和高富集物质（PBT/vPvB）进入环境，化学品管理机构加强源头管控，要求新化学物质登记需进行大量的实验和研究以完成环境风险评估。化学品的生物富集性评估是监管环境风险和危害评估的一个基本和强制性的部分，传统的生物富集实验周期长至

数周或数月，且需要使用较多的试验鱼，成本高。

在REACH法规下，脊椎动物试验只能作为获取数据最后的方法，目前我国对化学品和农药的安全性评价仍以动物实验为主的风险评估导向。2019年9月10日美国环保署发布减少动物试验的阶段性目标，指令中明确化学品安全评估中，需要优先考虑减少动物测试，要求更积极的采用动物替代方法。为了促进非动物测试方法和其他替代方法的发展，欧美各国已开始关注有害结局路径（AOP）

框架下所强调的作用机制，并开发了一系列体外替代方法。

尽管根据体外数据预测的生物富集系数可能无法完全替代体内鱼类生物富集试验的结果，但体外试验具有周期短、动物使用量少等明显优势，因此，当体

内测试技术不可行（如针对水溶性极低的化合物），或相应的监管框架不允许脊

2

椎动物测试时，体外试验成为了重要的替代方法。到目前为止较常用的体外替代方法是用QASR模型预测鱼体生物富集系数（bioconcentrationfactors,BCFs）。QASR模型的建立是基于受试物的分配系数正辛醇/水(Kow)，通常不考虑鱼类代谢对固有清除率的贡献，因此其预测结果往往与实验得到的生物富集结果存在较

大差异。

OECDNO.319B已于2018年生效使用，通过测量化学物质在RT-S9中清除速率，可评估化学物质在鱼类体内潜在的生物积累性和代谢稳定性，这是目前OECD标准中鱼类体外方面的最新技术。OECD的标准往往反映了某一领域的最新科技进展和管理实践，采用等同转换的原则制定我国技术标准有助于国内化学品测试领域跟进最新发展，提升技术水平，有助于更好地评估和管理化学品、工业产品等的风险，特别是在化学品安全评估方面，将该标准等同转换，将有利于符合动物福利的3R管理。此外，OECDGLP（良好实验室规范）数据互认体系允许成员国之间的测试数据互认，减少重复测试，降低成本，将其标准等同转换，将有利减少技术性贸易壁垒，促进国际贸易的便利化，提高国家的国际竞争

力。

（四）工作过程

本国家标准计划经国家标准化管理委员会批准后，主要起草单位广东省科学

院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）开展的主要工作如下：

1、文本起草

在接到标准编制任务后，广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检

测中心）组织成立了标准起草工作组，并进行了标准相关试验的研究工作。

2023年1月至3月，通过查阅资料和咨询水产养殖相关研究工作者，找到了种质资源优良、纯正的虹鳟鱼苗养殖基地，获得了体重大小满足要求的虹鳟鱼；研究建立了虹鳟鱼S9亚细胞组分制备关键技术，于2023年5月成功制备获得虹

鳟鱼亚细胞组分（RT-S9）。

2023年5月-8月，通过查阅文献，摸索优化底物和蛋白质浓度，此阶段完成了RT-S9亚细胞组分催化阶段I中细胞色素P450家族中CYP1A和催化阶段

II中谷胱甘肽转移酶（GST）酶活性验证工作。

3

2023年8月至2024年3月摸索RT-S9不同蛋白质浓度、受试物浓度和反应时间等参数，以芘为参比物，成功获得六氯苯、三氯卡班体外生物清除率CLINVITRO,INT，并以获得体外清除率结果外推获得体内清除率CLINVIVO,INT，进而根据模型预测生物富集系数。相比QASR模型和经典生物富集试验获得结果，RT-S9获得结果更接近动物试验结果，基于其耗时短（2小时VS28天），需要更少