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磁珠分离技术

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磁珠分离技术

摘要:磁珠分离技术是一种分子生物学分离技术,它利用其表面修饰的磁性颗粒

对生物分子或细胞的亲和结合而进行分离,能对待分离或待检测的靶标进行高

效富集,是一种方便、快速、回收率高、选择性强的方法。磁珠分离技术在生物

学方面的应用始于20世纪70年代后期,目前已经在分子生物学、细胞学、免疫

学、微生物学、生物化学等领域取得一些令人瞩目的研究成果。

基本概念

磁珠磁珠是一种通过一定方法将磁性无机粒子与有机高分子结合形成的具有一

定磁性及特殊结构的体积在几纳米到几十微米之间的载体微球。载体微球的核

心为金属小颗粒,常为铁的氧化物或铁的硫化物,核心外包裹一层高分子材料,最

外层是功能基团,载体微球表面可根据需要赋予不同的功能基团(如－OH、－

COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、

—环氧基、—CHCl等)，使其表现具有疏水-亲水、非极性-极性、带正电荷-带

负电荷等不同物理性质。同时具有磁响应性，在外磁场作用下具有磁导向性。

由于载体微球表现的物理性质不同,可结合不同的免疫配基,如抗体、抗原、

DNA、RNA等。

应用于磁分离技术的磁性载体微球应具备以下特点:粒径比较小,比表面积

较大,具有较大的吸附容量;物理和化学性能稳定,具有较高的机械强度,使用寿

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命长;具有可活化的反应基团,以用于亲和配基的固定化;粒径均一,能形成单分

散体系;悬浮性好,便于反应的有效进行。载体微球有纳米级、微粒级的,纳米级

的载体微球与微粒级的载体微球相比具有以下优点:尺寸小,扩散速度快,悬浮稳

定性好;比表面积大,偶联容量大;超顺磁性,能快速实现磁性粒子的分散与回

收。

磁珠的制备方法：共沉淀法、悬浮聚合法、乳液聚合法、分散聚合法、包

埋法及原子转移自由基聚合法等。

免疫磁珠免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB)简称磁珠,免疫磁珠由载体微球

和免疫配基结合而成。免疫磁珠的大小和形状的均一性,可使靶细胞迅速和有效

地结合到磁珠上;它的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非特异性结合;

超顺磁性可使磁珠置于磁场时,显示其磁性,从磁场移出时,磁性消除,磁珠分散;

保护性壳可防止金属颗粒漏出。

将磁珠按磁珠功能基结合的蛋白质不同分为:包被一抗的磁珠、包被二抗的

磁珠、未包被的磁珠和包被抗生物素的磁珠。并针对不同抗原制出包被相应抗

体的试剂盒,方便了使用。

免疫磁珠的主要特点有:分离速度快、效率高、可重复性好;操作简单、不

需要昂贵的仪器设备;不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能

免疫磁珠标记方法1直接磁珠和直接标记法：通过物理吸附和共价键结合直接

将特意性抗体与磁珠耦合，然后再与相应细胞结合，形成细胞-抗原-抗体-磁珠

复合物，在外磁场下直接分离目的细胞。快速、简单、特异性和细胞得率高，

灵敏度低，需制备相应的偶联抗体磁珠。2间接磁珠和间接标记法：使用anti-

lg等与磁珠偶联，通过Anti-lg再使磁珠与二抗体偶联，分离细胞时，先使细胞

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与一抗特异性结合，然后在与一抗标记磁珠结合，形成细胞-1抗-2抗-anti-lg-磁

珠复合体，在外磁场下分离目的细胞的方法。该法增加了细胞的洗涤步骤，特

异性也会降低。该法一般用于①没有直标磁珠抗体②需用几种抗体去除多种细

胞③目的细胞上特异性抗原分子表达水平低。

免疫磁珠分选方法阳性分选：运用特异性抗体偶联磁珠直接从细胞混合物中分

离目的细胞的分选方法称为positiveselection.阳性分选中磁珠标记的细胞即为

目的细胞。该法简单、快速、细胞得率和纯度较高。如采用anti-CD14磁珠分

选CD14+巨噬细胞。阴性分选：用抗体偶联磁珠去除无关细胞，使目的细胞得

以纯化和分离的分选方法称为negativeselection.阴性分选中磁珠标记的细胞为

++

非目的细胞。如分离CD4T细胞时，由于没有专用的CD4T细胞分选磁珠，

可通过anti-