- 1、本文档共7页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
流动相选择方法
流动相选择方法
1:由强到弱:一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验,这样
可以很快地得到分离结果,然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比
例。
2:三倍规则:每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量,保留因子约增加3
倍,此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中,注意观察各
个峰的分离情况。
3:粗调转微调:当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整为5%,
并据此规则逐渐降低调整率,直至各组分的分离情况不再改变。
液相色谱分析条件选择的基本原则
在液相色谱分析过程中,我们经常遇到的问题主要有二种,一种与液相色谱仪器
本身因素有关,如液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源以及其它的一些硬件
设备。出现这类问题后,如果能找出问题根源,解决起来一般很简单,而且这类
问题可以通过对仪器的精心维护来避免;而另一类问题则是分析方法本身造成的
问题,如出现色谱峰形状不好、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。不幸的是,
如果出现这类问题,看起来似乎很明显,但是要找出原因并解决这类问题却非常
困难。为了减少出现这一类型的问题,就必须在分析之前,仔细研究并选择一个
好的分析方法,有了一个好的分析方法,就很容易获得理想的分离效果,而且在
出现问题是也很便于找出原因。要选择一个好的分析方法,就必须对液相色谱分
析的一些基本原则要有一个很深的了解。下面是我们实验室对色谱分析人员进行
技能培训的一些基本知识。
一:分析方法选择的基本原则
假如你想做一顿丰盛的晚餐,首先必须看一下食谱,然后检查一下你所
需的东西是否齐全,如果少了配料还必须去商店购买,这样你才可能做出一顿可
口的晚餐。同样进行液相色谱分析时,也必须按照一定的程序进行,首先你必须
要有专门的仪器和试剂,然后有目的地选择分析方法,这样你才可能得到好的分
析结果,避免走一些弯路。
二:柱子的选择
在液相色谱分析方法中最重要的就是色谱柱的选择,色谱分析人员面对
几百种色谱柱,你从何入手呢?我采取的方法就是订阅LCGC亚太版中Ron
Majors的“色谱柱观察”这一专栏,自1984年第一期以来,RonMajors
在这一专栏中介绍许多新柱子、色谱柱新技术、色谱柱使用方法等方面的信息。
现在大部分液相色谱分析都是使用反相色谱柱,其中以C18和C8柱最
为流行。然而色谱分析并不是流行歌曲,这两种色谱柱之所以运用广泛是因为在
大多数情况下,使用这两种柱子都能获得理想的分离效果。尽管一些样品的分离
并不是这两种柱子(如表一所示),但C18和C8经常是最好的固定相,C18
和C8柱两者之间并无明显的差别,但在我们实验室中经常使用的是C8柱。
色谱分析人员遇到的多数样品需要利用反相色谱柱进行分析,但一些样
品可能需要其它的分析技术才能成功地分离,这些样品及分离方法在表一中作了
简要的叙述,在以后的章节中将进一步阐述。
表一:样品及分析方法
样品的特性分析方法及色谱柱
大分子量专用色谱柱、离子交换柱、size-excusion
色谱柱
手性异构体手性色谱柱
其它异构体(位置、立方体)正相色谱柱、没有改性的二氧化硅柱
无机盐混合物离子色谱分析
碳水化合物(糖类)反相氨基柱、离子交换法
在过去的15年中,高纯度、低金属杂质含量的硅胶基质色谱柱是最为
实用的色谱柱之一。但传统色谱分析用的硅胶颗粒具有差异性及酸性表面,固定
在柱子表面后,导致出现拖尾峰,而且柱与柱之间的重现性较差。最近硅胶基质
中出现一种新的产品,这种硅胶具有Metal-free特性,因此柱子性能更稳定,
重现性也更好,分离后峰的形状也很不错。这种改性后的
文档评论(0)