实验二、三、七 植物组织培养实验 - 菊花花瓣的分化培养.ppt

植物组织培养Ⅰ——培养基的配制及灭菌（一）储备液的配置与保存将配方中的药品一次称量供一段时间使用，即配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液就是储备液或母液。一般大量元素比使用液浓度高10-100倍，微量元素等可高200-1000倍。表4-1MS培养基储备液的配制成分用量（mg/l)每升培养基取用量（ml）储备液1（大量元素）NH4NO3KNO3CaCl2.2H2OMgSO4.7H2OKH2PO41650019000440037001700100储备液2（微量元素）KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O836202230860252.52.510储备液3（铁盐）FeSO4.7H2ONa2.EDTA.2H2O2780373010储备液4（有机成分）肌醇烟酸盐酸吡哆醇盐酸硫胺素甘氨酸1000050501020010培养基的配制菊花愈伤组织诱导培养基：MS+3mg/l6-BA+0.1mg/NAA+3%蔗糖1.先在洁净的不锈钢锅里放入约750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂（8克）和糖（30克）。2.加入各种母液(如大量元素100ml，微量元素、有机物、铁盐各10ml），按需要加入植物激素（如6-BA12ml、NAA1ml）。3.加蒸馏水将最终体积调整到1l。4.充分混合好以后，用1NKOH（或NaOH)调整PH值到所需值（5.8左右）。5.趁热将培养基倒入三角烧瓶中，可通过玻棒引流。6.包牛皮纸盖并用橡皮筋绑好。7.高压灭菌后取出。培养基的灭菌：打开放气阀煮沸至大量热蒸汽喷出，约5分钟后再关闭放气阀，待压力上升到121度1.1kg/cm2时，稳压20分钟。然后关闭电源，待压力降为零后，再打开放气阀。配置1升培养基分工：称重：1琼脂8克；2蔗糖30克；3肌醇100毫克。母液：1大量元素100ml；4铁盐10ml；2微量元素10ml；5生长素NAA1ml；3有机物质10ml；66-BA12ml.配置1升培养基分工：配置：75%酒精500ml准备：培养皿2副/人；饭盒——解剖刀柄2把；镊子（大、小）各两把；三角烧瓶50ml(倒培养基20-30ml)10个/人；三角烧瓶500ml(装蒸馏水300ml)3个；宽口瓶（大、小）各两个（500ml大宽口瓶分别用于装75%酒精和酒精棉球，250ml小宽口瓶用于装工业酒精插放切割器具）；小烧杯250ml三个；裁牛皮纸、做酒精棉球。培养基的配置及灭菌实验准备用品药品：95%乙醇1瓶蔗糖1瓶琼脂1瓶大量元素（10倍母液）1瓶微量元素（100倍母液）1瓶维生素（100倍母液）1瓶Fe盐（100倍母液）1瓶Ca盐（100倍母液）1瓶6-BA（10倍母液）1瓶NAA（10倍母液）1瓶器材：棉花1包橡皮筋1包PH试纸（5.4-7）1包牛皮纸