实验一(下) 特殊光学显微镜下的细胞和细胞器.ppt

LCSMImageofaXenopusMelanophoremicrotubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)AcomparisonofyeastcellsthatweregrowingonthevaginalepitheliumseenwithdifferenttypesofLM.a)underbright-field;b)phase-contrast;c)DIC倒置显微镜inversemicroscope物镜与照明系统颠倒；用于观察培养的活细胞，通常具有相差或DIC物镜，有的还具有荧光装置。暗视野显微镜一、实验目的了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。二、原理和结构特点1.原理根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察被检物体的显微镜。不让直射光线进入物镜的镜头，而是先让直射光线经过暗视野聚光器后改变途径，使其斜向射向被检物体。能观察到明视野下看不到的极其微小的物体，可判断物质颗粒的存在与否。最高分辨率可达0.004微米。主要用于微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。2.结构特点使用中央遮光板或暗视野聚光器（常用的是抛物面聚光器），使光源的中央光束被阻挡。不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。三、实验步骤1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，镜检。2.将暗视野聚光器安装在显微镜上，调强照明光。3.在聚光器透镜的上表面滴上镜头油。向上缓慢调升聚光镜，使镜头油与载玻片下表面缓缓接触。只有在油滴与载玻片的底面相接触后，光线才能射向标本。4.将标本置于载物台上，插入10x物镜，用调焦螺旋聚焦样品。实验一（下）、特殊光学显微镜的原理与使用?荧光显微镜（FluorescenceMicroscopy）?相差显微镜（phase-contrastmicroscope）?倒置显微镜（invertedmicroscope）?激光共焦扫描显微镜（LaserConfocalMicroscopy）?微分干涉显微镜（differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC）?录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）?暗视野显微镜（darkgroundmicroscope）?体视显微镜（stereomicroscope）荧光显微镜荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。荧光显微镜--光源多采用200W的超高压汞灯作光源国产超高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的进口灯泡荧光显微镜--光源多采用200W的超高压汞灯作光源国产超高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的进口灯泡荧光显微镜--滤色系统滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。荧光显微镜--滤色系统荧光显微镜--滤色系统1．激发滤板根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。紫外光激发滤板：此滤板可使400nm以下的紫外光透过，阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5，外加一块BG-38，以除去红色尾波。紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3，外加BG-38。紫蓝光激发滤板：它可使350～490nm的光通过。常用型号为QB24（BG12）。最大吸收峰在500nm以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。荧光显微镜--滤色系统2．压制滤板压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应滤长范围的荧光。与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板：紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫