传染病的细菌鉴定实验报告.docx

` 试验三、细菌的分别鉴定

一、试验目的：

虞加丽

通过从禽类病变器官中分别纯化菌株，把握培育基的制备与灭菌技术、微生物的筛选、分别纯化方法和无菌操作技术。

复习以前学过的各种染色方法，把握生化试验和药敏试验的原理与方法。

把握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。二、试验原理：

微生物的分别与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分别与纯化。此次试验实行平板分别法，该方法操作简便，普遍用于微生物的分别与纯化，其根本原理主要包括两个方面：

选择适合于待分别微生物的生长条件或参加某种抑制剂造成只利于待分离微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰大局部不需要的微生物。

微生物在固体培育基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞生殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培育。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术来完成。微生物的观看可以用显微镜观看其细胞形态，也可以用肉眼观看其菌落形态。前者是微生物的显微镜观看技术，后者是微生物的肉眼观看技术。

平板划线法：平板划线分别法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培育基外表通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培育后生长生殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分别微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞生殖而来的，故必需反复分别屡次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培育基外表屡次作“由点到线”稀释而到达分别目的的。

革兰氏染色：G+、G-细菌的细胞壁成分和构造不同。G+的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状构造组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状构造中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保存在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容

易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。

微生物的生理生化反响原理：在全部生活细胞中存在的全部生物化学反响称之为代谢。代谢过程主要是酶促反响过程。很多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反响。各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用一样的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反响来鉴别细菌。

药敏试验原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片四周区域集中形成递减的梯度浓度。在纸片四周抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透亮的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度〔MIC〕呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

试管凝集试验原理：在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，消灭肉眼可见的凝集现象。

三、试验材料与方法：

病鸡剖解：解剖盘，解剖剪，标记笔

病料采集

无菌接种：LB血琼脂平板，酒精灯，火柴，接种环，酒精棉球或刀片血平板划线：单菌落技术，强调无菌，标记平板，导致培育过夜。

美兰染色：美蓝染液，显微镜，擦镜纸，废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，生理盐水，组织抹片〔肝〕、美兰染色、镜检

动物试验：小白鼠，生理盐水，Ep管，空白培育皿，一次性注射器

病料裂开后加生理盐水制成悬液〔1:5〕，接种0.2ml/只,死亡后剖解并观看病变并记录。

病死鸭剖解

鉴别培育基：LB一般琼脂平板，麦康凯培育基，接种环，酒精灯病料接种过夜培育物

革兰氏染色

试管凝集试验：阳性血清，生理盐水，分装生理盐水的小试管

生化试验：

生化反响管：葡萄糖，半乳糖，果糖，麦芽糖，甘露醇，鼠李糖，蔗糖，吲哚

药敏试验

药敏片，氨苄青霉素，卡那霉素，诺氟沙星，磺胺异恶唑，强力霉素，头孢曲松

四、试验结果：

病鸡剖检

外观病症：脱毛，歪脖，鸡冠泛白，角弓反张，无下痢

器官病变：心包有积液，啤酒样，肝脏上有白色针尖灶，脾脏肿大呈黑紫色，肾脏肿大，食管有大量黄色粘液，肺脏上有明显的黄白色坏死灶，器官上有出血点，肠道出血。

美兰染色镜检

镜检，呈红色，为革兰氏阴性菌

病鼠剖解

全身性出血，肝肾肿大。

病鸭剖解

有纤维素性渗出物附着在心脏上，肝脏肿大出血，心包有白色积液，脱肛，花斑肾。

6.生化试验试管凝集试验：未产生凝集现象

6.生化试验

果糖、鼠李糖颜色未变化，葡萄糖、蔗糖呈黄色，半乳糖、麦芽糖呈浅黄绿色，

甘露醇由上到下呈浅绿色至蓝紫色。吲哚试纸无变化，呈阴性反响

。

7.药敏试验结果

抑菌圈半径：卡那霉素：1.7cm;强力霉素：0.93cm；头孢曲松：1.0cm；氨苄西林：0.3cm;磺胺异恶唑：0.3cm