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酶联免疫吸附测定技术

（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay，ELISA）;复杂生物体系中生命物质的化学测量是揭示生命奥秘的重要手段，在食品检验、疾病诊断和预防的过程中也日益凸现其重要作用。;于是，一系列针对生物体系中化学成分的测量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员，它将免疫学知识与化学分析手段有机结合，为生命体系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。;免疫酶技术（immunoenzymatictechnique）是继50年代的免疫荧光（IFA）和60年代的放射免疫（RIA）分析技术之后，1971年Engvall和Perlmann又发展起来的一种新技术。

是利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。;免疫酶技术的原理是用酶标记的抗原（或抗体）用于免疫反应，并以相应的底物被酶分解的显色反应对样品中的抗体（或抗原）进行定位、定性和定量的分析和鉴定。;免疫酶技术;ELISA现在已成为目前生物技术领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。目前，该项技术已在医学、兽医学、法医学上得到广泛的应用，大多数传染病都有ELISA检测方法。;;;;包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化。

抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定。

酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物，使发生酶促反应而显色。

;;加样本;振荡、洗板;加入酶标记的抗原;;振荡、洗板;加入底物显色液;;三、酶联免疫吸附试验的特点;特点一：灵敏性

该测定法的灵敏度来自作为标记的酶。酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

如，在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法的敏感度约为5~10μg/ml。

;特点二：特异性

其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体??结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。;酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物，是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反应。;酶;肉眼判定结果：

于白色背景上直接肉眼观察。颜色越深，反应越强；阴性反应为无色或极浅。根据颜色的深浅，以“＋”、“－”表示。各组各人独立观察记录。

测定A值：

在酶标仪上，根据不同底物设定波长，以空白孔调零后测各孔OD值。以高于阴性对照孔OD值2倍为阳性。;结果的判定;定量方法：标准曲线;ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）

②酶标记的抗原或抗体（标记物）

③酶作用的底物（显色剂）;ELISA的类型和操作步骤;（一）直接ELISA（检测抗体）;（二）间接法（检测抗体）;间接法;;;;;（三）双抗体夹心法（检测抗原）;双抗体夹心法;;（四）竞争法（检测抗原、抗体）;竞争法（检测抗原）;;;用已知特异性

抗体包被

固相载体;对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。因此，加入底物后显色反应较弱。;（四）捕获法测IgM抗体;捕获法测IgM抗体;捕获法;;（五）ABS-ELISA;五、酶联免疫分析技术的设备;六、ELISA的应用;病原微生物及其抗体检测如:肝炎病毒等;ELISA检测“非典型肺炎”冠状病毒;饲料中盐酸克伦特罗的测定

饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）

饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）;河豚毒素;;酶联免疫分析技术的局限性;应用酶联免疫分析的产品;ELISA试剂盒商业资讯;ELISA试剂盒;酶联免疫井;DNM-9602G酶标分析仪;在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）

②酶标记的抗原或抗体（标记物）

③酶作用的底物（显色剂）;;包被固相载体:

用已知抗原包被

固相载体;获得待分析物的未标定抗体