备课素材：病毒的检测方法高二上学期生物人教版(2023年)选择性必修.docx

病毒的检测方法

病毒性疾病的临床诊断主要是利用建立在抗原和抗体特异性反响根底

上的免疫学方法，这些方法或者是以抗原来检测抗体，或者是以抗体来检测抗原，免疫学方法所进展的病毒诊断准确、灵敏、快速、简便、成本低。

用于病毒学的免疫学方法

免疫学检测技 原理

术

病毒中和

抗体中和病毒的感染性，CPE抑制，蚀斑减数或动物被保护

血凝抑制 抗体抑制病毒的血细胞凝集作用

酶免疫试验 酶标记抗原(或抗体)与抗体(或抗原)结合底物转变颜色

放射免疫测定免疫荧光

放射性标记的抗体(或抗原)与抗原(或抗体)结合，放射性同位素计数器或放射自显影检查

免疫过氧化物过氧化物酶标记的抗体与细胞内抗原结合；在底物作用

免疫过氧化物

过氧化物酶标记的抗体与细胞内抗原结合；

在底物作用

酶染色

免疫电镜

下，产生有色的沉淀物

抗体聚拢的病毒体在电镜下可见

免疫胶体金

胶体金标记的链酶亲和素与 DNA上的生物素特异性结合，通过信号放大，直接目视化检测病毒种类

免疫毛细管区空毛细管两端加一个外加电压，通过电泳迁移和电渗流带电泳 的作用，样品中的不同组分由于迁移率的不同而分开

免疫PCR

用抗体来捕获抗原，提取核酸后，再用PCR扩增DNA片段，从而放大抗原抗体反响

快速免疫滤纸把待测病毒的抗体吸附在乳胶颗粒上，通过大颗粒乳胶测定法 间接反响小颗粒病毒的存在

补体结合

抗原-抗体复合物与补体结合，使得对溶血素敏感的绵羊红血球细胞不再溶血

免疫粘连血凝 抗原-抗体复合物结合凝集红血球细胞的 C3

免疫双集中 抗体与抗原在凝胶中产生可见的沉淀线

单向集中 抗体从孔中集中，与凝胶中的抗原形成沉淀带

单向溶血

抗体集中到凝胶中，参加的补体溶解吸附有病毒的红血球细胞

反向被动血凝 抗原凝集被抗体致敏的红血球细胞乳胶凝集 抗体凝集结合有抗原的乳胶颗粒

血凝抑制试验

血凝抑制试验是于有血细胞凝集活性的病毒悬液中，参加特异性的病毒抗菌素血清，再参加适宜种类运动的红血球细胞，并在适宜温度和 pH条件

下孵育。由于特异性的病毒抗体与病毒的有血细胞凝集活性的外表蛋白质

〔如流感病毒的血凝素〕，可抑制血细胞凝集反响发生，这是血凝抑制

〔HemagglutinationInhibition 〕现象。利用这一现象所设计的血凝抑制试验是鉴定血细胞凝集性病毒的常用方法。这种方法灵敏，除披膜病毒

〔Togavirus〕以外，对于其它的病毒都有很高的特异性，而且方法简洁、快速、试验本钱低。在试验时，抗血清必需经 56℃、30分钟预处理，以除去非特异性抑制物。

中和试验

中和试验是病毒免疫学中一个格外重要的试验。在病毒的中和作用

〔neutralization〕性质上建立，即某些特异性的病毒抗体与病毒作用后，能够使其失去感染性，抑制病毒的生殖。这类病毒抗体叫作中和抗体

〔neutralizingAbs〕。病毒的中和作用不但表现在质的方面，即一种病毒的感染性只能被特异性的抗体中和，而且还表现在量的方面，即中和肯定量病毒的感染性必需有肯定效价的病毒抗血清。中和试验仍是以测定病毒感染

性的方法进展，因此又有不同的方法。

补体结合试验〔Complementfixationassay 〕

补体结合试验可用于检测血清中病毒抗体的存在。补体的作用为能与抗原—抗体复合物结合，但不能与抗原单独结合，也不易与抗体单独结合；补体的作用没有特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合，它也能与红细胞和溶血素的复合物结合，引起红细胞破坏〔溶血〕。病毒抗原与相应抗体结合后，其抗原抗体复合物可以结合补体，如再参加红细胞和溶血素，则不会产生溶血现象；假设血清中无病毒抗体，补体与红细胞结合则会引起溶血。此反响即为补体结合反响。补体结合试验操作繁杂，且需格外细致，反响的各个因子的量必需有恰当的比例。

酶联免疫吸附测定〔Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA〕酶联免疫吸附测定是一种承受固相〔主要为聚苯乙烯酶联板〕吸附，将

免疫反响和酶的高效催化反响有机结合的方法，其根本原理是以酶催化的

颜色反响指示抗原抗体的结合。ELISA方法简洁，灵敏度高，特异性强，适于大量样品的检测，目前该方法已被广泛用于植物病毒检测。在此根底上加以改进又进展了一些的检测方法，如A蛋白酶联吸附〔SPA-ELISA〕、斑点免疫吸附〔DIBA〕、直接组织斑免疫测定〔IDDTB〕、伏安酶联免疫分析、快速ELISA等。

免疫沉淀(Immunoprecipation)和免疫印迹(Immunoblotting)

免疫沉淀反响主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的状况下，按适当比例