标准菌种的管理与传代程序.docx

上 海 1 1 制 药 有 限 公 司

标

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题

文件号码

发行日期

版本号码

:SMB004

:

标准菌种的治理与传代程序

:

:共

3

第

1

页

10

页

姓名及职位 签名 日期

起草人 :111QC组

起草人 :

111

QC组MB担当

复核人 :

11

QC组科长

批准人 :

11

质量治理部副部长

11

工厂长

变 更

历

史

变更号码

C-0374

描

述

第一次改版

修改人

11

发行日期

2023/11/14

C-0478

其次次改版

11

2023/5/26

FD-001/0

FD-002/0

FD-002/0

上 海 1 1 制 药 有 限 公 司标 题 文件号码

发行日期

标准菌种的治理与传代程序 版本号码

第2页

1.0 目的 Purpose

标准菌种的治理与传代有一个比较标准的程序。

2.0 范围 Scope

上海11制药内的微生物试验室标准菌种的治理与传代。

3.0 适用文件 ApplicableDocument(s)

大肠杆菌检测标准操作程序?ChP法? SMB-102铜绿假单胞菌检测标准操作程序?ChP法? SMB-103金黄色葡萄球菌检测标准操作程序?ChP法? SMB-104沙门菌检测标准操作程序?ChP法? SMB-105

大肠杆菌检测标准操作程序?JP法? SMB-112

铜绿假单胞菌检测标准操作程序?JP法? SMB-113金黄色葡萄球菌检测标准操作程序?JP法? SMB-114沙门菌检测标准操作程序?JP法? SMB-115

大肠菌群检测标准操作程序?Sankyo法? SMB-122铜绿假单胞菌检测标准操作程序?Sankyo法? SMB-123金黄色葡萄球菌检测标准操作程序?Sankyo法?SMB-124革兰氏染色标准操作程序 SMB-001

培育基的养分试验 SMB-011

培育基配制与治理标准操作程序 SMB－007

4.0相关部门ResponsibleSection(s)

质量治理部

物件预备

:SMB 004

:

: 3

:共10页

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发行日期

版本号码

:SMB 004

:

标准菌种的治理与传代程序

:

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:共10页

设备与仪器

接种环，生物安全柜，-80℃冷冻冰箱，恒温培育箱，高压蒸汽灭菌器，5℃冰箱，1ml菌种冷冻管，放菌种冷冻管的盒子，塑封袋，标明菌种名称、接种日期及接种人的标签纸，1ml加样枪，烧杯，试管及配套硅胶塞，显微镜、水浴锅

试剂及菌种

大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲酶菌、10%甘油，灭菌生理盐水，革兰氏染色液、0.1%亚甲蓝液

〔注：本公司购入的菌种标准分为ATCC和CMCC两种〕

培育基

养分琼脂培育基，养分肉汤培育基、酪蛋白胨琼脂培育基、马铃薯葡萄糖琼脂培育基、酵母霉菌琼脂培育基

操作步骤

10%甘油的制备：

将甘油配制成10%浓度的溶液，然后用1ml加样枪，将10%的甘油溶液加到1ml菌种冷冻管中，盖上菌种冷冻管盖子，但不能将盖子拧紧。再将盖上盖子的菌种冷冻管放入烧杯内进展121℃、30分钟高压蒸汽灭菌。灭菌完毕后，将烧杯中的菌种冷冻管放入生物安全柜内，拧紧盖子放入放菌种冷冻管的盒子内，再将盒子放入5℃冰箱保存，备用。

标准菌种制备与治理

标准菌种冷冻管的制备〔第一代〕

将购入的标准菌种在24小时内移入以上制备好的10％灭菌甘油内。即从5℃冰箱取出已预备好的10%灭菌甘油菌种冷冻管置于生物安全柜内，用冷却灭菌接种环从标准菌种斜面上挑取1～2个菌落接种至10%的灭菌甘油菌种冷冻管中，制成108的菌悬液，拧紧菌种冷冻管的盖子放入相配套的塑封袋中，同时放入该菌的标签纸，再将放有同一种菌的小的塑封袋放入一个较大的塑封袋中，放入－80℃带锁的冰箱内。一般标准菌种在超低温冰箱内能保存5年，平均每年每种菌用4支冷冻管，每三个月用一支冷冻管。

其次、三代工作菌种的制备：

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标准菌种的治理与传代程序

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:共10页

从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的水浴中进展解冻1分钟。

解冻后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于10ml灭菌养分肉汤培育基中，置于35～37℃的培育箱内18～24小时，进展增菌培育。?其次代?

培育后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培育基斜面上贴