PCR电泳实验步骤.docx

水稻DNA提取，扩增与电泳实验

一、1掌握DNA的提取技术2掌握PCR的相关操作3掌握了解电泳操作方法和步骤

二、实验原理：1、提取DNA一般用水稻幼叶，先用机械方法液氮研磨植物组织使组织细胞破碎，然后加TPS抽提液水浴提取DNA，最后用无水乙醇沉淀DNA即可。（DNA提取原理）2、DNA在高温时可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。（PCR原理）3、琼脂糖凝胶电泳：借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离。

三、实验仪器和药品

液氮、镊子、手套、移液枪、枪头2ML和1.5ML离心管、水稻幼叶、研磨棒、琼脂糖、天平、PCR仪、LoadingBuffer染色剂、灭菌双蒸水、摇床、离心仪、Taq酶、Mg2+Buffer、dNTP溶液、引物、TPS抽提液、无水乙醇、电泳槽、GoldView、TBE溶液、微波炉、锥形瓶、量筒、PCR板、PCR盖、水浴箱、Marker

四、实验步骤

1、DNA提取

取水稻叶子少量置于2ML离心管内，加入液氮研磨，带磨成粉状后，加1MLTPS抽提液，然后将离心管放入75℃恒温水浴箱中至少半小时。同时将无水乙醇放入-40℃下冷冻

水域结束后，取出离心管放入离心仪中，13600r/min离心12min，然后小心的取出离心管，将上清液转移到1.5ml离心管中0.5ml，加入600ul冷冻的无水乙醇，放入-80℃下冻10min，拿出放入离心仪13600r/min离心5min

到处上清液，倒置，晾干约3h

加入双灭菌水60ml，放入摇床中振荡一夜。2、PCR

按所需配料表，向PCR板中加入双蒸水,mix,前引物，后引物，然后加入提取的DNA，混匀

将PCR板放入PCR仪中运行SSR程序3、电泳

称取0.3g琼脂糖和30mlTBE溶液。混匀倒入锥形瓶中，加热溶解混匀。待冷却至不烫手时加入GoldView，混匀，倒入已经插好梳子的配胶槽中，冷却30min至1h

将冷却好的凝胶拔掉梳子后放入电泳槽中（将有点样孔的一端靠近负极）然后按照顺序点样，每个样的用来那个为4ul，在中间的空上点Marker溶液3ul

打开电泳开关，电泳32min左右

电泳结束后，将胶取出，放入透视镜下照射，拍照，读带五注意事项

1、提取dna的时候用乙醇是沉淀时，必须将乙醇冰冻

2、在PCR之前加2ulDNA时要将枪头插入液面下